AM-AM-FS-Ac-20024 桔汁中的甜菜碱

AMAMFSAc20024  桔汁  甜菜碱  分光光度法

AM-AM-FS-Ac-20024

桔汁中的甜菜碱

1.试剂

(a)氨溶液——2%；140ml NH₃·H₂O用水稀释至2L。

(b)雷纳克酸铵溶液——2.5%；2.5g雷纳克酸铵溶于75ml水中，振摇3Omin。滤纸过滤，稀释至100.Oml。用HCl调pH至1.0并用细密玻璃砂漏斗过滤。在甜莱碱沉淀之前制备新鲜溶液。不能使用有沉淀的试剂。

(c)丙酮溶液——70%；70ml丙酮用水稀释至100ml。

(d)含水乙醚——140ml乙醚中加水1ml。

(e)离子交换树脂——(1)AmberliteIR-120中等粒度(20-50目，湿式)磺化聚苯乙烯阳离子交换树脂——用2倍柱床体积(约500ml)的2M HCl处理，以制备250g H型树指。浸泡2h，排出HCl，水洗至中性且无Cl¯存在。(2)AmberIiteIRA-400强碱型阴离子交换树指(20-50目，湿)——用2倍柱床体积(约5OOml)的2M NaOH处理制备250gOH型树脂，排出NaOH，水洗至无NaOH存在。立即与IRC-50型阳离子交换树脂混合制备柱Ⅱ。(3)AmberliteIRC-50制备阳离子交换树脂——用2倍柱床体积的2M HCl处理125g H型树脂，排出HCl，水洗至无Clˉ存在。

(f)甜菜碱标准溶液——每毫升溶液1mg无水甜菜碱。称0.2623g盐酸甜菜碱于200ml容量瓶中，用水稀释至刻度。

2.试验过程

2.1.柱的制备

(a)柱Ⅰ——直径18mm内径色谱管，带有中等孔率或粗孔熔结玻璃、旋塞阀。把浸在水中的AmberliteIR-l2O(H)阳离子交换树脂浆加到柱中，湿树脂床高12.5cm。再生时可加100-12Oml 1M HCl，并用水洗至无Clˉ存在。

(b)柱Ⅱ——将2体积的AmberliteIRA-400(OH)阴离子交换树脂和1体积的IRC-5O(H)阳离子交换树脂紧密混合，按上述转入柱，使树脂床高7.5cm。由于树脂具有不同比重，过量的水会使它们产生不必要的分层。所以柱床要密切混合。混合型树脂不能再生，仅能供2次测定。

2.2.样品的制备

按AOAC官方方法920.149 (a) 的方法制备果汁样品。 果汁充分振摇混匀，以保证试样均匀，用脂棉或快速滤纸过滤。也可压榨熟透了的水果并过滤制备鲜果汁，榨取柑桔汁使用专门装置并再过滤。

2.3.测定

在小烧杯中将制备好的果汁准确取样10-2Oml(内含甜菜碱5-7mg)。用水稀释至约30ml，加0.1M HCl用pH计调pH至3.0，转移到柱1，以3ml/min的流速收集流出液。当液面到达树脂床顶端，用2OOml水洗柱或洗至无糖类存在。弃去流出液和洗涤液。用不少于15Oml 2% NH₃·H₂O溶液把甜菜碱洗出，确保流出液是碱性。再用1OOml水洗柱。将流出液煮沸蒸发至约25ml，冷却，用0.1M HCl调pH至7.0，再转移到柱1(在锥形瓶中煮沸浓缩，转至小烧杯中调pH)。

以1ml/min的流速收集流出液。当液体到达树脂床顶端，用50ml水洗柱。把流出液和洗涤液混合并浓缩至15-2Oml，冷却，用1M HCl调pH至1.0。继续冷却至0±3℃，搅拌下逐渐加入20ml 2.5%雷纳克酸钱溶液，调pH至1.0，冷却至0±3℃，井在此温度下放置3h。用60ml中等孔率玻璃砂漏斗趁冷抽吸过滤。用少量冷的滤液转移沉淀。每次用5ml含水乙醚洗涤沉淀3次。将沉淀溶于10ml 70%丙酮，转移至25ml容量瓶中，用70%丙酮稀释至刻度。用1cm测定池以70%丙酮作参比，在分光光度计525nm处测定吸光度(4h内读数)。从标准曲线查得甜菜碱量。

2.4.标准曲线的绘制

用10ml移液管将2.5，5.0，7.5，10.0，12.5和15.Oml的甜菜碱标准溶液分别转移至烧杯中，加水至20ml，按2.3从“用1M HCl调pH至1.0”处开始。

以无水甜菜碱mg/ml相对于吸光度绘制标准曲线，应是一条直线。

3.来源

AOAC官方方法970.41（第17版）