AM-AM-FS-Ac-12025 食品和饮料中的季铵化合物

AMAMFSAc12025  食品  饮料  季铵化合物  溴酚蓝法

AM-AM-FS-Ac-12025

食品和饮料中的季铵化合物

1.仪器和试剂

1.1 仪器

蒸汽蒸馏装置——见17-24A(a)（蒸汽蒸馏装置——装置的组成：能提供恒速蒸汽以产生恒速蒸馏的烧瓶(3L)，蒸馏烧瓶，冷凝器和200ml容量瓶(作接受器)。瓶颈中部附加的侧臂(外径约9mm)和蒸汽导入管(外径约10mm)的标准蒸馏烧瓶。蒸汽发生器的加热线圈是1.5m长的28号镍铬合金丝(或等效的)缠成的直径约为6mm的空心管状线圈，经加热发红再回火制成的。引入是铜的或其他非铁的金属丝，直径约2mm。将导线和接点绝缘并屏蔽，避免可能的短路和电击。只要处理能力在方法规定的范围并能在醋酸蒸馏时得到57±2%的回收率，任何类似的装置都可用。）的发生器，用500mI或1L的蒸馏瓶，装上喷水色9-7B(c)，喷水管伸进瓶内离瓶底1或2cm以内(都用＄接头连接)，配有用于蒸汽入口的塞子(在刚开始蒸馏时用)，合适的装置详见2-47A（(a)充水的水蒸汽发生器——一般可利用3.8L的油罐。(b)蒸馏瓶——体积为样品的两倍，并带$24/40接口的圆底烧瓶。(c)蒸馏头——底部和支端均为$24/40的阳接口，整个接引器呈75°角；顶端则为$14/35的阴接口，文管伸展并弯曲至与垂直的冷凝管相联。(d)喷射管——带有$接口的用于Woulff瓶的接引管，充气管上有$14/35接口，球的孔径约2mm，联接管的长度应使仪器安装后球在蒸馏瓶底上部≤20mm处。(e)冷凝管——蛇形冷凝管，顶端有$24/40接口，外套管长250—300mm，出口管伸出约200mm，可伸到500ml锥形接收瓶底。）。

1.2 试剂

    (a)碳酸钠溶液——将5gNa₂CO₃溶于500ml水中。

    (b)硫酸钠——无水粒状 (不是粉状)。

    (c)D.C.12——十二烷基二甲基苄基氯化铵，或其它固体季铵化合物。

    (d)溴酚蓝溶液——将40mg溴酚蓝溶于温水中，冷却，稀释至100ml。

    通过下述试验检查溴酚蓝的纯度：将20mg溴酚蓝放入125ml分液漏斗中；加入50mlCH₂ClCH₂Cl和5ml 1%Na₂CO₃溶液，摇动到溶解。放置直到混合物分成二层。下层溶液应是无色的；上层溶液是紫红色的。加入含0.1mgD.C.12或其它QAC的10ml溶液，再次摇动，使之分层。下层溶液应是澄清的蓝色。放出下层溶液并在光度计上检测。吸收峰应在约608nm处。将其吸收曲线与在C中所述的纯化过的样品的吸收曲线进行比较。如果试验中得到的溶液是黄色或绿色或者其吸收曲线与C中纯化过的样品的吸收曲线基本上不同，则要按C对样品进行纯化。

2试验过程

    (注意：谨慎地洗净所有的玻璃器皿，尤其要避免肥皂，因为肥皂和QAC会发生反应。如果清洗中用了肥皂，用水淋洗全部玻璃器皿。要用乙醇洗所有的移液管，然后抽干。)

2.1.溴酚蓝的纯化

    将2g溴酚蓝放入400ml烧杯里，溶于25ml 1%Na₂CO₃溶液中。用约300ml水将试液转移到1L分液漏斗中。加入500mlCH₂ClCH₂Cl并振荡。加入1ml含有10mgD.C.12或其它QAC的溶液振荡使提取完全。如果下层是黄色的，再加几份1mlD.C.12溶液并振荡到溶液分成二层，下层溶液成为绿色。放出下层溶液并弃去。向分液漏斗内加入200mlCH₂ClCH₂Cl和1mlD.C.12，振荡。这时候下层溶液应是纯蓝色。如果下层是绿色，放出下层，并再加CH₂ClCH₂Cl和D.C.12直至得到蓝色溶液。用几份100ml一份的CH₂ClCH₂Cl洗涤水层直到下层是无色或只有很浅的蓝色。用HCl酸化水层，用CH₂ClCH₂Cl提取黄色沉淀，直到水层成为很浅的黄色。蒸去大部分CH₂ClCH₂Cl，剩余部分在烧杯里自然挥发。将残渣研成粉末，取一部分按B(d)进行纯度试验。如果合适，就可以用作试剂。

2.2.标准曲线的制备

    按12-24B所述标定1%的QAC溶液。(如果这个化合物不适用，可用任何己知组成的固态QAC，如D.C.12，即十二烷基二甲基苄基氯化铵。如有必要，使用氰铁酸盐法12-24B，标定的商品溶液制备标准溶液)。按下述方法操作，在50mlCH₂ClCH₂Cl中配制这个化合物的一系列溶液，在分光光度计或比色计上于610nm测定最大浓度或最小浓度的吸光度A。配制一套3个标准的50ml溶液，溶液中含有QAC的量在前述的最大和最小的浓度之间。按下面的方法制备标准(如果使用Beckman分光光度计，适宜的标准浓度是0.0，0.1，0.2和0.25mg/50ml)。

    用移液管取每个标准溶液50ml，放入分液漏斗里，加入3ml溴酚蓝溶液，1mlHCl(1+1)和50mlCH₂ClCH₂Cl，振荡2—3min。当溶液变清时，放出下层溶液，放入另一个盛有10mlNa₂CO₃溶液的分液漏斗内，振荡2—3min。放置直到溶液变清，把下层溶液放入装有1—2gNa₂CO₃的具玻璃塞瓶中。30min后在仪器上读数(对所有标准使用相同或相似的比色皿，滤光片中心为610nm)。如果读数是吸光度A，或者读数与A成比例，则以读数对浓度作图；如果仪器读数是透射比T，在作图以前先换算成A。

2.3.样品的制备

    (a)含有果汁的瓶装饮料——混匀。用量筒取50ml样品。用7cm瓷漏斗过滤，用水稀释滤液至100ml(溶液1)。将滤纸放入400ml烧杯里，用几份少量乙醇提取直到提取液没有颜色且滤纸成为白色。将乙醇提取液放入500ml蒸馏瓶中;加入10mg溴酚蓝，2mlHCl(1+1)和100ml水。用蒸汽蒸馏并收集蒸馏液体积≥100ml，比提取液的乙醇体积大些。在蒸馏瓶中冷却残留物，转移到分液漏斗中，用40,30和30ml一份的石油醚洗涤残留物。然后按F的步骤操作。

    取合适的一份溶液1(第一次试用5ml)转移到分液漏斗里，加入3ml溴酚蓝溶液和1mlHCl(1+1)。然后按2.4的步骤操作。

    (b)啤酒——将100ml赶去CO₂的啤酒，放入蒸汽蒸馏瓶里，加入10ml溴酚蓝和2mlHCl(1+1)，蒸汽蒸馏，收集约200ml蒸馏液。冷却残余物，转移到分液漏斗里，用100和50ml一份的石油醚洗涤，然后按2.4的步骤操作。

    (c)餐用糖浆——将20g样品转移到100ml容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀。用移液管取一份溶液放入分液漏斗，加入5ml溴酚蓝溶液和1mlHCl(1+1)，然后按2.4步骤操作。

    (d)鸡蛋——用已称重的50ml烧杯称取12.5士0.25g混合好的样品放入烧杯中。加入10ml水，用搅棒混匀，仔细倒入250ml容量瓶内，再用5—10ml水洗涤烧杯，将洗涤液也放入容量瓶。一边回荡容量瓶一边逐渐加入丙酮，一次加一点点，不断混合，直到加到容量瓶刻度，塞紧并倒转几次。放置10—15min，然后用折叠滤纸过滤 (Whatman No.12,18.5cm)到250ml量筒内直到得到200ml滤液。将滤液倒入1L分液漏斗中，用25ml丙酮洗涤量筒的壁。洗涤液也并入分液漏斗。用量筒取250ml水并加到分液漏斗里。加入25mlHCl(1+1)到分液漏斗里，混匀。在分液漏斗里分别用300，250，150和100ml石油醚提取溶液，慢慢摇动以防止乳化。将水提取液转入600—800ml的烧杯里，放入2—3个玻璃珠，在蒸汽浴上蒸发至50—75ml。

    蒸发后加入10mg溴酚蓝和用少量水洗涤烧杯壁。当溶液冷却后，移取50ml的CH₂ClCH₂Cl，放入烧杯，让溶剂沿烧杯壁往下流。将烧杯内溶液倒进250ml分液漏斗，用少量水洗涤烧杯。振荡约1min。将液体重新倒回烧杯，倒时让液体沿烧杯壁流下。再次将溶液倒回分液漏斗，振荡2min，以下按2.4操作。

2.4.测定

    吸取50mlCH₂ClCH₂Cl，放入分液漏斗E(a),(b)或(c)，振荡3—4min。放置到溶液变清，放出下层到另一个装有10ml 1%Na₂CO₃溶液的分液漏斗，摇3—4min，分层，观察下层溶液。如果溶液变蓝，就表明有季铵基存在。从颜色的深度来判断它是否适于在光度计上测定。如果颜色深度适合于测定就不用稀释，把下层溶液放入装有1-2gNa₂SO₄的具玻璃塞的瓶中干燥，放置30min。转移到合适的比色皿中在仪器上于610nm处测定。再从标准曲线上确定QAC的量，D，然后以mg/100ml为单位计算样品量。

    如果对于直接测量颜色太深，用1—2mlHCl(1+1)酸化第二个分液漏斗中的溶液。振荡到颜色变黄，然后再放回第一个分液漏斗。吸取第二份50mlCH₂ClCH₂Cl放入第一个分液漏斗，摇3—4min，放置到下层溶液变清，然后放出下层溶液到瓶内。(如果已知样品含量大于1mgQAC/100ml，可以一次加入全部100mlCH₂ClCH₂Cl)。

    按下法测定适宜的一份：吸取5ml，放入125ml分液漏斗中，用25mlCH₂ClCH₂Cl稀释，加入10ml 1%Na₂CO₃溶液，仔细摇2min。放置，观察下层溶液。如果颜色深度适于测量，用移液管移取20mlCH₂ClCH₂C1稀释至50ml。摇1min，放置，放出下层溶液，按上述方法干燥，测定。如果颜色不够深，再以5ml的增量添加浴液直到得到适宜的颜色。如有必要，加入溶剂使总量为50ml，摇荡，放出下层溶液，干燥，然后在仪器上读数。

    当确定了适当的一份溶液，用下述方法检查：吸取一份CH₂ClCH₂Cl溶液放入50ml容量瓶中，用CH₂ClCH₂Cl稀释至刻度，倒入125ml分液漏斗中。吸取10ml 1%Na₂CO₃溶液放入容量瓶，转动，倒进分液漏斗，用洗瓶以2—3ml水冲洗容量瓶。振荡，放置，放出下层溶液。干燥，然后测定。如果所取试液≤10ml，则加入约5mg干燥溴酚蓝到分液漏斗中。

    对于瓶装的含果汁的饮料，把在残余物测得的QAC的量和在溶液1中测得的量加在一起是样品中的总含量。

3.来源

AOAC  官方方法 942.13 （第17版）