AM-AM-FS-Jp-0014 脂肪酸的测定，气相色谱法定量及定性

AMAMFSJp0014脂肪酸 气相色谱法 定量 定性

AM-AM-FS-Jp-0014

脂肪酸的测定，气相色谱法定量及定性

1.原理概要

     提取脂肪后，使脂肪酸甲酯化，用气相色谱仪FID检测。

2.主要试剂和仪器

2.1.主要试剂

5mol/L 氢氧化钾甲醇溶液（即28% KOH甲醇溶液），甲醇要无水。

内标溶液：用正己烷溶解浓度为1mg/ml。

脂肪酸标准溶液：棕榈酸（软脂酸），硬脂酸，亚麻酸，亚油酸等脂肪酸甲酯的混合物，用己烷溶解浓度为1mg/ml。

2.2.仪器

气相色谱仪：带氢焰离子化检测器（FID）和毛细管柱。

    水解装置。

3.过程简述：

3.1.制备实验溶液：

提取脂肪：

准确称取试样约5克，加水16毫升，均质化，然后全部转移至分液漏斗中，加入氯仿：甲醇（2：1）100毫升，振摇5分钟，混合，静置，分出氯仿层，再加入氯仿：甲醇（2：1）100毫升进行提取，振摇，静置，分出氯仿层，合并氯仿层，在氯仿提取溶液中加入0.5%的氯化钠水溶液100毫升洗涤氯仿层，弃去水层，用无水硫酸钠干燥脱水，在氮气下，40℃以下减压旋转蒸发掉氯仿得到脂肪。

3.2.脂肪酸甲酯化：

精密称取提取的脂肪约20毫克，加入1毫升苯溶解脂肪，转移至分液漏斗中，加入0.5mol/L氢氧化钾甲醇溶液2毫升，振摇，于室温放置10分钟，加入0.5mol/L醋酸溶液2毫升中和碱，加入4毫升正己烷和1.0毫升内标溶液，混合振摇，静置使己烷层分出来，水层再用己烷5毫升提取一次，合并己烷层，用无水硫酸钠：硫酸氢钠（2：1）过滤己烷溶液，在氮气下，于40℃以下减压旋转蒸发掉己烷，残渣准确加入5.0毫升己烷溶解，作为样液。

3.3.气相色谱检测与气相色谱条件：

色谱柱：PEG20毛细管色谱柱（0.25 i.d*30m膜厚0.25um）；

柱温：140～240℃（升温速度3～5℃/min）；

进样口及检测器的温度：240～250℃；

分流比：1：25～50；

He气流量：1～2ml/min；

N₂气流量：40～50ml/min。

定量实验：将样品溶液和标准溶液分别取1微升注入色谱柱，得到标准脂肪酸色谱图及保留时间，与样品脂肪酸的保留时间进行比较，确定其位置以便定量。

定量检验：与定性实验同样的条件进行色谱测定，得到各脂肪酸的峰面积，用内标法计算。

4.结果计算

                    P₁ × 1000

X  =                 × 100

          P₂ × G         

X——脂肪中各种脂肪酸的含量，mg/g。

P₁—各种脂肪酸的峰面积；

P₂—内标物的峰面积；

G—称取脂肪的量，mg。

5.来源：