AMAMFSJp0006食物纤维 一般法
AM-AM-FS-Jp-0006
食物纤维的测定（一般法）
1.适用范围
2.原理概要
酶法用淀粉酶及蛋白酶将样品消化去除脂肪，蛋白及灰分所剩的残渣即为食物纤维。
3.主要试剂和仪器
3.1.主要试剂
0.5mol/L磷酸盐缓冲溶液：Na2HPO4 0.875g(或Na2HPO4·2H2O用1.10g, Na2HPO4·12H2O用6.05g),加水溶解，调节PH为6.0，稀释至1000ml。
热稳定的α-淀粉酶溶液。
蛋白酶：用0.05mol/L磷酸盐缓冲溶液配成50mg/ml的溶液，用时现配。
淀粉葡萄糖甙酶。
0.171mol/L NaOH溶液：NaOH 6.84g用水溶解稀释至1000ml。
0.205mol/L H3PO4溶液：85% H3PO4 23.g溶于1000ml水中。
过滤用铈硅石（cerite）,用酸洗净后，在550℃加热一小时，备用。
3.2.仪器
耐热砂心漏斗G2，洗净，于525℃±5℃加热，加入约0.5克铈硅石，水洗3次，用78%乙醇20ml洗3次，风干，晾干，在130℃±5℃加热一小时,恒重，备用，在干燥器中保存。
恒温水浴：可设定温度60±2℃，在磁力搅拌下进行酶反应。
4.过程简述
4.1. 样品的准备：
谷类、豆类、种子类水分少的食品，可用过32目的粉末。蔬菜、海藻类等 水分多的食品直接或者均质后冷冻干燥或在70℃干燥过夜，粉末过32目筛。这样的粉末如果含10%以上的脂肪，称取5~10克粉末放入到200~400毫升大小的烧杯中，按照每克样品加入25毫升石油醚的比例加入烧杯中，搅拌15分钟，放置一分钟，用G2坩埚过滤，同样操作进行两次，最后再用石油醚洗坩埚，风干后，于70℃干燥过夜，称重，全过32目以下筛。求出干燥后及脱脂后重量减少的比例，W%，F%。
4.2. 试验操作：
4.2.1.用α-淀粉酶消化样品：精确称取脱脂后的样品1.000克±0.001克两份。分别放入两个400毫升烧杯中。一个用来测定蛋白质（S1毫克），另一份用来测定灰分（S2毫克）。在两个烧杯中，加入0.05mol/L磷酸缓冲溶液50毫升和0.1毫升热稳定的α-淀粉酶溶液。用铝箔盖上，放在沸腾的水浴中，在开始5分钟，要搅拌其内部温度达到95℃以上时消化30分钟。
4.2.2.蛋白酶消化：α-淀粉酶消化后，加入10毫升0.171mol/L NaOH调节PH为7.5±0.1，加入蛋白酶溶液0.1毫升，用铝箔盖上烧杯，在60℃水浴中振摇加热反应30分钟。
4.2.3.淀粉葡萄糖甙酶消化：消化后冷却加入10毫升，0.205mol/L H3PO4溶液，调节PH为4.5±0.2，加入甙酶液0.1毫升，用铝箔盖上烧杯，在60℃水浴振动加热反应30分钟。
4.2.4.生成沉淀：在室温条件下，在烧杯中加入反应液总体积4倍的乙醇，加热至60℃停止加热，室温放置一小时使食物纤维沉淀。
4.2.5.过滤：将铺有硅藻土的玻璃坩埚过滤器（G2）用78%乙醇洗净，然后边抽滤边倒入反应液，全部过滤完后，用78%乙醇20毫升洗残渣，反复3次，再用乙醇溶液10毫升洗沉淀，反复2次。最后用丙酮10毫升洗残渣，反复2次。
4.2.6.干燥称重：将含有残渣的坩埚过滤器，在烘箱105℃±5℃干燥一夜，取出放在干燥器中冷却至室温，准确称重，分别为R1 mg和R2 mg。
4.2.7.残渣中的蛋白质定量：用常规方法（凯氏定氮法）测定残渣中的蛋白质系数为6.25，得蛋白质为P mg。
4.2.8.灰化定量：残渣于马弗炉（525±5）℃灰化5小时，取出在干燥器冷却至室温，精确称重，得残渣中灰分为A mg。
4.2.9.空白试验：从第一步开始同样作空白试验，各项数据为RB1，RB2和蛋白质含量PB，灰分含量AB。
5.结果计算
(RB1+RB2)－(PB/RB1+AB/RB2) ×(RB1+RB2)
B mg =
2
干燥，脱脂样品中食物纤维含量（D%：）
(R1+R2) － (P/R1+A/R2) × (R1+R2)-2B
D% = × 100
S1+S2
W+F
原样中食物纤维含量TDF%=D ×（1 － ）
100
6.来源
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