MM_FS_CNJ_0073 出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0073出口 禽肉 二氯二甲吡啶酚 残留量 乙酰化-气相色谱法 内标法定量

MM_FS_CNJ_0073

      出口禽肉中二氯二甲吡啶酚残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口冻鸡中二氯二甲吡啶酚残留量的检验。

2.原理概要

    用甲醇提取样品中二氯二甲吡啶酚，经氧化铝和阴离子交换树脂柱净化。与乙酸酐反应，转化成相应的酯，用气相色谱电子俘获检测器测定，内标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    甲醇：分析纯，经全玻璃装置重蒸馏，收集～65℃馏分；

    正己烷：分析纯，经全玻璃装置重蒸馏，收集67～69℃馏分；

    无水硫酸钠：分析纯，经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用；

    氧化铝：中性，净化用，100～200目；300℃灼烧4h，置于干燥器备用；

    阴离子交换树脂：Dowex 1-x8 100～200目，Cl型；

    助滤剂：Celite 5，使用前用甲醇清洗；

    乙酸酐：重蒸馏；

    吡啶；

    苯；

    氢氧化钠；

    氢氧化钠溶液：1mol/L；取40.0g氢氧化钠溶解于1000mL去离子水中；

    乙酸钠；

    乙酸钠溶液：0.5mol/L；溶解68.0g乙酸钠于1000mL去离子水中；

    四硼酸钠；

    四硼酸钠溶液：0.1mol/L；取38.1g四硼酸钠溶于1000mL去离子水中；

    冰乙酸；

    乙酸-甲醇溶液：0.5%；将2.5mL冰乙酸加到477.5mL甲醇中；

    硫酸钠溶液：2%；取2g硫酸钠溶解于100mL去离子水中；

    二氯二甲吡啶酚和六氯苯标准品：纯度≥99%；

    二氯二甲吡啶酚标准溶液：准确称取适量的二氯二甲吡啶酚标准品，用甲醇配成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，根据需要再配成适当浓度的标准工作溶液；

    内标溶液：准确称取适量的六氯苯标准品，用苯配成浓度为100μg/mL的标准储备溶液，根据需要再用正己烷配成适当浓度的内标工作溶液。

3.2.仪器

    气相色谱仪，配有电子俘获检测器；

    组织捣碎机；

    均质器；

    离心机；

    离心管：具磨口塞，5mL；

    氧化铝柱：20cm×20mm(id)玻璃柱，柱底部填约0.5cm高的脱脂棉，装8～9cm高的氧化铝，用前经甲醇淋洗；

    阴离子交换树脂柱：15cm×10mm(id)玻璃柱，将阴离子交换树脂伴以去离子水装入柱内，高度为2cm，注入100mL氢氧化钠溶液淋洗，然后用去离子水洗涤至中性。再用100mL乙酸钠溶液淋洗，用去离子水洗涤至中性。最后用50mL甲醇水溶液80%(V/V)洗涤后备用(流速为2mL/min)；

    微量注射器：10μL、100μL。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数随机抽取，逐件开启。每件至少取500g或一袋作为原始样品，原始样品总量不得少于2kg。放入清洁容器内，加封后，标明标记，及时送实验室。

4.4.试样制备

    将所取原始样品缩分出1kg，取可食部分，经组织捣碎机捣碎均匀，均分成两份，装入洁净容器内，作为试样。密封，并标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取

    称取试样20g(精确到0.1g)于均质杯中，加入50mL甲醇和3g助滤剂，高速均质3min。在布氏漏斗上敷上2g助滤剂，抽滤均质后的样品，用45mL甲醇分3次洗涤均质杯并移入布氏漏斗中抽滤。将滤液并入100mL容量瓶中，用甲醇定容，并混匀。

5.2.净化

    将阴离子交换柱置于氧化铝柱下，吸取50mL提取液注入氧化铝柱内，控制提取液在阴离子交换柱的流速为1mL/min，用20mL甲醇冲洗两柱。除去氧化铝柱，弃去全部的流出液。用20mL乙酸-甲醇溶液(0.5%)洗脱二氯二甲吡啶酚，洗脱液收集于25mL容量瓶中，用甲醇定容。

5.3.乙酰化

    吸取5.0mL洗脱液于离心管中，在50～60℃水浴中，用氮气吹干。加4mL四硼酸钠溶液(0.1mol/L)溶解残渣，离心管置于50℃水浴中5min。依次加入1.0mL内标工作溶液、10μL吡啶和75μL乙酸酐，加塞，振摇1min，2000r/min离心5min。将正己烷相转入另一离心管中，加无水硫酸钠脱水后供气相色谱测定。

5.4.标准物的乙酰化

    取适用浓度的标准工作溶液，用氮气吹干，按5.3进行乙酰化反应。

5.5.测定

5.5.1.色谱条件

色谱柱：玻璃柱，2m×3mm(id)，填充物为3%OV-17＋3.3%QF-1涂于Chromosorb WhP(100～120 目)；

色谱柱温度：150℃；

进样口温度：220℃；

检测器温度：250℃；

氮气：纯度≥99.99%，65mL/min。

5.5.2.色谱测定

    分别准确注入5μL经乙酰化后的样液和标准工作溶液于气相色谱仪中，按5.5.1的条件进行分析。响应值均应在仪器检测的线性范围之内。

    在上述色谱条件下，二氯二甲吡啶酚的保留时间约为4.0min，六氯苯约为11min。

5.6.空白试验

    除不加试样外，按上述测定步骤进行。

6.结果计算

    用色谱数据处理机或按下式计算试样中二氯二甲吡啶酚残留含量：

式中：X——试样中二氯二甲吡啶酚残留量，mg/kg；

c_s——标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚的浓度，μg/mL；

c_si——标准工作溶液中六氯苯的浓度，μg/mL；

h——样液中二氯二甲吡啶酚乙酯的峰高，mm；

h_i——样液中六氯苯的峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中二氯二甲吡啶酚乙酯的峰高，mm；

h_si——标准工作溶液中六氯苯的峰高，mm；

m_i——样液中的六氯苯添加量，μg；

m——最终样液所代表的样品重量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

7.测定低限、回收率

7.1.测定低限

    本方法测定低限为0.005mg/kg。

7.2.回收率

    回收率的实验数据：二氯二甲吡啶酚添加浓度在0.005～0.050mg/kg范围内，回收率为：77.0%～100.0%。

8.来源：

    SN  0283—93