AM-AM-FS-Ac-17025 海味中的脂肪酸（挥发性）

AMAMFSAc17025  海味  脂肪酸（挥发性）  色谱分离C₂-C₄的饱和脂肪酸

AM-AM-FS-Ac-17025

海味中的脂肪酸 (挥发性)

1.试验过程

1.1.分配柱的制备

    置5g硅酸于上釉瓷蒸发皿中，加1ml红R指示剂溶液和刚好使1M的NH₄OH对其显示碱性颜色的指示剂(通常1滴足够)。加大量水使硅酸吸透，在BuOH-CHCl₃溶液中不变粘或结块(每批硅酸的加水量都必须测定，通常硅酸重量的变化为50—75%)。用研棒充分混合均匀，加约25ml、1%的丁醇氯仿溶液，混成粘稠液以易于倒出。将其倾入色谱管，管的收缩端颈部塞有小棉花团，倒入时微微倾斜管，避免带进空气。如倒入时形成气泡，用长玻璃棒搅动管内悬浮物赶出气泡。

    垂直夹住管，在顶部插入带有1?L的橡胶塞，其上装有一根弯成90°角的玻璃管，用本生夹夹住管的受力处，连接玻璃弯管与压力源(压缩气体钢瓶)，17-24A(C)。调节压力至34.5—68.9KPa，使剩余溶液受压通过柱滴下。

    在剩余溶液移动期间，凝胶填充物下降。当柱填装物下移时，凝胶微粒会附在管壁上，但最后，管壁上的凝胶基本上也会挪走。这时是柱的最佳密度状态，柱已制成备用。加压直至溶液到达柱表面，如溶液低于表面通过，会引起干柱或柱的"龟裂"，或者出现气泡，则要将管中填充物冲洗出，用溶液再混成浆状，重新装柱。

1.2.硅酸适用性试验及柱的标定

    (a)标准酸溶液的制备——吸取下列酸各1ml，分别置于1L容量瓶：乙酸、丙酸、丁酸和戊酸，用水稀释到刻度并混匀，每种溶液吸取10ml分别置于125ml锥形瓶，以甲酚红为指示剂用0.01M NaOH滴定，至粉红色持续约45s。

    ml0.01M NaOH×当量浓度×F=mg酸/ml标准溶液

式中:F=乙酸为6.01；丙酸为7.41；丁酸为8.8；戊酸10.2。

    (b)标准混合酸的制备——吸取50ml各酸的标准溶液，于同一个250ml的容量瓶中，用水稀释到刻度。在标准混合酸中，每种酸的浓度=1/5标准酸溶液浓度。

    (c)已知样品的制备——分别吸取标准混合酸5ml，和25m1，于50ml烧杯里，以酚酞为指示剂，用0.1M NaOH滴至恰好中和。再过量加入10滴。在蒸汽浴上蒸干，如需要，也可对5m1各种标准酸溶液和5ml各种标准酸溶液的5倍稀释液单独作色谱分析。也可制备近似样品组分的混合样液。

    (d)柱分离—— (高效的分离和回收率取决于样品所用移动溶液的量)向干燥钠盐残留物加2ml 1%的丁醇氯仿溶液。用玻璃棒边搅动边滴加硫酸(1+1)直到所有钠盐都转为游离酸 (对刚果红试纸呈酸性)，加1g无水Na₂SO₄。

    酸以下列顺序流出:戊酸、丁酸、丙酸和乙酸。在柱下放50ml量筒作接受器，缓缓向柱内加上层清液，使之沿管壁而下，不要扰动柱的水平表面。加压，直至溶液达到胶体表面。用1ml溶液洗烧杯，注入柱并用玻璃搅棒将烧杯里的残留物转移进柱。加压，直至溶液将消失而进入Na₂SO₄层。用另外1ml溶液洗烧杯，转移进柱，用1ml溶液洗管内壁，加压，至溶液刚消失而进入Na₂SO₄层。用溶液注满管，每次，一个谱带前沿(低边沿)到达管收缩最窄部分之上2—5mm处时，记下收集的体积，更换接受器。对每种酸而言，在连续操作中，总累计体积是用于鉴别谱带的阈限。丙酸(第三条谱带)流出后，用10%醇氯仿溶液注满管，用该溶液洗脱乙酸(约50ml 1%丁醇氯仿溶液通过柱后，丙酸被洗脱。观察实际所用体积。在连续操作中，不管丙酸出现与否，都按该体积，更换为10%丁醇氯仿溶液)。

    将洗脱液分别移至各个125ml锥形瓶，水洗各量筒三遍，每次5ml。加1滴甲酚红指示剂溶液，用0.01M碱滴定，当终点临近时，塞住瓶，用力摇摇，使酸从液相中完全萃取出来。每一条谱带洗脱液的滴定量都要作如下的空白校正。空白如下测定:在任何酸流出前，都收集25ml从柱中流出的丁醇-氯仿溶液，加15ml冷开水，用0.01M碱如上滴定。

    如果谱带分离不清晰或回收率小于90%，则废弃此硅酸。

1.3.鉴定和测定

    加1滴1M NaOH到17-27E中所得的己中和的蒸馏液A中，蒸发至较少体积，转移到50ml烧杯中，在蒸汽浴上蒸干，严格按17-28B(d)进行。

    对酸的鉴定，可用各酸的阈限体积与标定操作中所得己知酸的近似相同量和比率的比较，每种已知量的脂肪酸的阈限体积具有特征性，在相同条件下具有重复性。但如操作条件改变，比如不是同一批硅酸或虽是同一批但不同量或水量不同，对每种酸的阈限体积都必须重测(如存在异丁酸，按正丁酸测定)。按特征盐类进一步鉴定。各种酸也可用纸色谱法鉴定。

    酸的毫克数/100g样品

    =经空白校正的0.01M NaOH毫升数×当量浓度×F

式中:F包括对蒸馏回收率和稀释液校正的酸的重量。F=乙酸为421；丙酸为366；丁酸为383。

    (注意:因子只适用于按17-27D制备的样品，如为其他样品，象鸡蛋，必须用合适的因子)。

2.来源

AOAC  官方方法945.52（第17版）