AM-AM-FS-Eu-0011 磺胺-用HPTLC筛选方法测定肉中的磺胺

AMAMFSEu0011肉 磺胺 HPTLC筛选法

AM-AM-FS-Eu-0011

磺胺——用HPTLC筛选方法测定肉中的磺胺

1.适用范围：

      此方法使用于肉，包括成熟的牛、牛犊、猪和家禽中磺胺残留的筛选。

2.原理概要

此方法由四部分组成：

    二氯甲烷均质和提取；

用sep—pakSIL小柱和磷酸盐缓冲液净化；

反相提取到乙酸乙酯中；

在硅胶板上HPTLC展开，用荧光检测。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

丙酮；正丁醇；三氯甲烷；二氯甲烷；

磷酸氢二钾；乙酸乙酯；荧光胺；

甲醇；氢氧化钠；硫酸钠；

低沸点石油醚；蒸馏水；正磷酸；

溶液：

0.1M氢氧化钠，溶解4gNaOH到1L水中；

0.05M，PH=10磷酸缓冲溶液，溶解4.36gK₂HPO₄，大约400ml水，用NaOH调节PH=10，最后定容1L；

HPTLC溶剂：4份氯仿和1份正丁醇混合，现配现用；

荧光胺溶液：溶解5g荧光胺到50ml丙酮中，溶液暗处保存2星期有效。

0.5M正磷酸溶液，取大约50ml水到量桶中，小心加入3.4ml正磷酸，最后定容到100ml；

标准：

磺胺标准：

贮存液大约100μg/ml，精确称取大约10mg标准到100ml刻度容量瓶中，用甲醇定容到刻度。4-8℃暗处保存，稳定1个月；

工作液，1μg/ml吸取1ml贮存液到100ml容量瓶中，用甲醇定容，4-8℃暗处贮存，稳定1星期；

用于回收的标准液，1μg/ml，吸取1ml贮存液到100ml容量瓶中，用水定容，现配现用；

3.2.仪器：硅胶板：10×10cm，硅胶60没有荧光指示剂。

4.过程简述

4.1准备一份含有磺胺和空白的样品，添加磺胺量10μg/Kg

4.2样品贮存在-20℃。

4.3最初提取

4.3.1家禽肉（鸡肉）

      称10g绞碎的样品连同4.1准备的样品一起，分别加入25ml二氯甲烷，提取2分钟，用玻璃棉过滤到100ml容量瓶中，重复此步骤2遍。

4.3.2牛肉和猪肉

       称取10g绞碎的样品连同4.1准备的样品一起，分别加入25ml二氯甲烷，超声10分钟，温度不能超过40℃。用玻璃棉过滤到100ml容量瓶中，重复此步骤2遍。加入25ml低沸点石油醚，混合。sep—pak小柱净化。把sep-pak小柱与50ml容器连接。把全部提取液到入小柱，用5ml二氯甲烷冲洗小柱（注意：50ml过柱大约需要15min）。用5ml磷酸缓冲液PH=10，收集最初3ml至刻度试管中。控制PH，用磷酸或NaOH调节，使收集洗脱液PH6.5-7.0之间。洗脱液加入1ml乙酸乙酯，混合30秒钟，然后离心分层，取0.5ml乙酸乙酯至4ml试管中，在氮气条件下干燥，残留物用50μl乙酸乙酯溶解。

4.4 HPTLC

     吸取10μl样品提取液上板子，点样距底边1.5cm，点与点之间距离0.75-1cm，用氮气吹干板子。从左至右点顺序为：1，标准；2，空白；3，添加回收；4，试验样品2；6，试验样品3；7，标准；8，试验样品4；9，试验样品5；10，试验样品6；11，参考标准；12，标准。在展开槽中加入溶剂，深度0.5cm，平衡30min。把板子放入溶剂中，溶剂上移4cm。取出板子，暗处放置，用铅笔标出溶剂的位置。在通风柜中干燥20min，用荧光胺溶液喷板子，5min后，在紫外灯366nm观察。磺胺点有黄-绿色特征。用铅笔记录下磺胺点的具体位置。

5.结果说明

      磺胺点具有黄-绿色。必须检查回收。稳定性：点出现很快，如果在阳光下2小时即消失，必须保存暗处，喷荧光胺后板子必须在30min内观察。

6.来源：

欧盟食品分析方法Sg3.2.