AM-AM-FS-Ac-19048 蜂蜜的糖化活性

AMAMFSAc19048  蜂蜜  糖化活性  电位测定法

AM-AM-FS-Ac-19048

蜂蜜的糖化活性

1.原理概要

缓冲的可溶性淀粉-蜂蜜溶液进行温育，所需时间根据所要达到的特定终点用光度法加以确定。其结果表示为1g蜂蜜中的酶在一小时内所水解1%淀粉的毫升数。

2.仪器和试剂

2.1 仪器

    (a)反应容器——在18×175mm的试管侧面连接一个18×6Omm的封闭支管。支管接在试管从下到上1OOmm处，与试管的下部成45°角。

    (b)光电光度计——配660nm红光滤光片或60Onm干涉滤光片，1cm样品池。

2.2 试剂

    (a)碘贮备液——将8.80g经重新升华的I溶解在含22g KI的30-40ml水中，用水稀释至1L。

    (b)碘溶液——0.0007Mol/L。将2Og KI和5ml碘溶液(a)溶解在水中，并稀释至5OOml每两天新配一次。

    (C)乙酸缓冲液——pH5.3(1.59Mol/L)。将87g NaOAC·3H₂O溶解到400ml水中，将大约10.5ml HOAC溶解到水中，稀释至5OOml。必要时可用NaOAc或HOAC调pH至5.30。

    (d)NaCl溶液——0.5Mol/L。将14.5g NaCl溶解在水中，稀释到5OOml。

    (e)淀粉溶液——称量2.000g可溶性淀粉(专用于糖化指数测定，或相当产品)，将其与9Oml水在锥形瓶中混合。迅速加热至沸腾，尽量多摇动瓶子。减弱加热，温和地沸腾3min，盖上，让其冷却至室温。转移至1OOml容量瓶，并稀释至刻度。仔细观察淀粉碘空白吸光度A值的变化极限。

3.试验过程

(对此测定不要加热样品)

3.1.标定

    移取5ml淀粉溶液与1Oml水混合，从中取1ml加到一系列含1Oml稀碘溶液的50ml量筒中。混匀取一份用水稀释并确定稀释的体积，必须使吸光度A为0.76±0.02。这是所用淀粉溶液制剂的标准稀释度。当淀粉来源变化时应重复该步骤。

3.2.测定

称量5g样品到9Oml烧杯中，用10-15ml水和2.5ml缓冲液溶解，转移至装有1.5ml NaCl溶液的25ml容量瓶中。稀释至刻度(在加到NaCl溶液之前样品液应是缓冲液)。

    移取5ml淀粉溶液到反应试管的支管中，1Oml样品液加到反应管中，小心不要让两种溶液混合。将反应管放进一个40±0.02℃的水浴中15min，然后将反应管前后倾斜，并使两个溶液混匀，同时开起停表，5min时移取1ml溶液，并迅速加入到盛有10.00ml稀碘的5Oml量筒中，混合，稀释至预先确定的体积，在光度计上测定吸光度A值。记下淀粉与蜂蜜混合后取1ml加入到碘溶液之间的时间，该时间为反应时间，间隔一定时间后再取1ml进行类似的测定，直到吸光度A＜O.235。

    吸光度                                    终点(min)

    0.7                                       ＞25

    0.65                                      20-25

    0.6                                       15-18

    0.55                                      11-13

    0.5                                       9-10

    0.45                                      7-8

3.3.计算

    做A与时间(min)的相关图，从起始的A值开始做一条直线，让尽量多的点通过直线。由直线上查出A=0.235时的反应时间。用该时间除以300便可以得到淀粉糖化酶数(DN)。

注:对一个高DN(＞35)的样品，如果来得及测定一个0.20左右的A值，那么5min读数(测定)足以接近终点。对于准确的测定，可重复测定，从开始起每分钟测定一次。对于低DN值的样品，可根据1Omin时的读数预测终点时间。在接近终点几分钟之前不必再测定，只需有2个这样的读数，5min时的读数不能准确预测低DN值体系的终点时间。

4.来源

AOAC官方方法958.09（第17版）