AM-AM-FS-Ac-19038 蜂蜜中脯氨酸

AMAMFSAc19038  蜂蜜  脯氨酸  吸光光度法

AM-AM-FS-Ac-19038

蜂蜜中脯氨酸

1.原理概要

脯氨酸是蜂蜜中的主要游离氨基酸，它与酸性茚三酮溶液反应形成有色化合物。来自其它氨基酸的干扰可忽略不计（≤5%）。

2.仪器和试剂

2.1 仪器

    反应管——18×13Omm硼硅玻璃，有螺旋盖的管，带聚四氟乙烯衬垫。

2.2 试剂

(a)茚三酮溶液——3%。将3.0g茚三酮溶解于100ml不含过氧化物的乙二醇单甲醚中。将溶剂（不是试剂）保存于有金属锌的琥珀色瓶中。

    (b)L-(-)-脯氨酸——在真空干燥箱中干燥，然后保存于保干器中。按下述方法制备标准溶液:(1)贮备液——0.5mg/ml H₂O，将25mg脯氨酸用水溶解并定容至5Oml。低温保存。(2)工作液——50µg/ml。用水将1Oml贮备液稀释到1OOml。每天新配制。

3.试验过程

    称量2.5OOg蜂蜜转移至5Oml容量瓶中，用水稀释至刻度。用移液管向3个反应管中分别移取0.5ml，加0.25ml甲酸及1.OOml苟三酮溶液。盖紧盖子，摇匀后放在沸水浴中15min。在99℃的水浴中冷却5min，打开盖子，向每个反应管中分别加入5ml水合异丙醇(1+1)。混匀，然后以水做空白对照测定样品在52Onm处的吸光度A，在冷却的35min内把所有的样品测量完。

    按下述方法校正蜂蜜的颜色:配制含0.5ml上述测定中制备的蜂蜜溶液，1.25ml水和5.00m1异丙醇(1+1)的溶液，测定该溶液的吸光度A。在进行计算之前从反应后样品液的吸光度中减去该溶液的吸光度。

按测定步骤中的方法制备工作曲线，用脯氨酸标准溶液代替蜂蜜溶液。取0.5ml 50µg/ml的脯氨酸溶液装在10mm样品池中，其吸光度A大约为0.35。

计算每1OOg蜂蜜中所含脯氨酸的毫克数。

4.来源

AOAC官方方法979.20（第17版）