MM_FS_CNJ_0082 出口禽肉中乙胺嘧啶残留量检验方法

MM_FS_CNJ_0082出口 禽肉 乙胺嘧啶 残留量 液相色谱法 外标法定量

MM_FS_CNJ_0082

      出口禽肉中乙胺嘧啶残留量检验方法

1.适用范围

    本方法适用于出口冻鸡中乙胺嘧啶残留量的检验。

2.原理概要

    用乙腈-三氯甲烷提取试样中残留的乙胺嘧啶，提取液经蒸干后，用硫酸钠水溶液浸出，用正己烷提取净化。水相再用乙腈-三氯甲烷提取，提取液蒸干后，用流动相溶解残渣，溶液供高效液相色谱法(HPLC)测定，外标法定量。

3.主要试剂和仪器

3.1.主要试剂

    乙腈：HPLC级；

    甲醇：HPLC级；

    冰乙酸；

    正己烷；

    无水硫酸钠；

    乙腈-三氯甲烷(10＋1)混合液；

    乙腈-三氯甲烷(1＋2)混合液；

    硫酸钠水溶液：10%(m/v)；

    硫酸钠水溶液：2%(m/v)；

    乙胺嘧啶标准品：纯度≥99%；

    乙胺嘧啶标准溶液：准确称取100mg乙胺嘧啶标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，配成浓度为1.00mg/mL标准储备液。根据需要由标准储备液用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作溶液。

3.2.仪器

    高效液相色谱仪：配有紫外检测器；

    捣碎机；

    快速混匀器或匀浆机；

    多功能微量化样品处理仪，或相当者；

    离心机：4000r/min；

    超声波发生器；

    微量可调移液管：40～100μL，200～1000μL；

    离心管：15mL；

    微量进样器：20μL；

    尖嘴吸液管。

4.试样的抽取与制备

4.1.检验批

    以不超过2500件商品为一检验批。

    同一检验批的商品应具有相同特征，如包装、标记、产地、规格和等级等。

4.2.抽样数量

4.3.抽样方法

    按规定的抽样件数，随机抽取，逐件开启。从每件中抽取一袋作为原始样品。总量不少于2kg，装入清洁的容器内，加封后，标明标记并及时送实验室。

    如每件中无小包装，或有小包装但重量超过2kg者，则可用灭菌锋利刀在抽出的包件中，每件割取不少于100g。混合后置于清洁容器内，作为混合原始样。混合原始样的重量不少于2kg。加封后，标明标记，及时送交实验室。

4.4.试样制备

    从混合原始样品中取出部分有代表性的样品，将可食部分放入捣碎机中捣碎均匀，充分混匀。用四分法缩分出不少于500g，装入清洁的容器内作为试样，加封后，标明标记。

4.5.试样保存

    将试样于－18℃以下冷冻保存。

注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

5.过程简述

5.1.提取和净化

    称取约2g试样(精确至0.01g)，置于15mL离心管内，加入0.5mL10%硫酸钠水溶液和5mL乙腈-三氯甲烷(10＋1)混合液。在快速混匀器上剧烈混合成匀浆，以提取乙胺嘧啶。其后，以3000r/min速度离心3min。用尖嘴吸液管将上清液转入第二支15mL离心管内，再用2mL乙腈-三氯甲烷(10＋1)混合液提取残渣，离心3min，提取液并入第二支离心管。将该离心管置于多功能微量化样品处理仪上，于40℃以下蒸发至干。向残渣中加入1mL2%硫酸钠水溶液和2mL正己烷，在快速混匀器上剧烈混合，使残渣溶解，离心3min。用尖嘴吸液管移去正己烷层，并舍弃。再用2mL正己烷洗一次，同法弃正己烷相。分别向水相中加入3mL、2mL乙腈-三氯甲烷(1＋2)混合液，于快速混匀器上剧烈混合，以提取水相中乙胺嘧啶，离心3min。用尖嘴吸液管将下层有机相转入第三支离心管内，于多功能微量化样品处理仪上，在40℃以下蒸发至干。以流动相溶解残渣，并准确定容为1.0mL。经0.45μm滤膜过滤，供HPLC测定。

5.2.测定

5.2.1.液相色谱条件

色谱柱：ODS-C18色谱柱，5μm(粒径)，15cm×4.6mm(内径)；

柱温：40℃；

流动相：甲醇-水-乙酸(40＋60＋0.6)；

流速：0.7mL/min；

检测器：UV；

检测波长：232nm；

进样量：20μL。

5.2.2.色谱测定

根据样液中乙胺嘧啶含量情况，选定峰高相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中乙胺嘧啶响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液等体积穿插进样测定。在上述色谱条件下，乙胺嘧啶保留时间约为7.8min。

5.3.空白试验

    除不加试样外，均按上述测定步骤进行。

6.结果的计算

    用色谱数据处理机，或按式(1)计算试样中乙胺嘧啶残留量：

式中：X——试样中乙胺嘧啶残留含量，mg/kg；

h——样液中乙胺嘧啶峰高，mm；

h_s——标准工作溶液中乙胺嘧啶峰高，mm；

c——标准工作溶液中乙胺嘧啶浓度，μg/mL；

V——样液最终定容体积，mL；

m——称取的试样量，g。

注：计算结果需扣除空白值。

7.低限、回收率的测定

7.1.测定低限

    本方法的测定低限为0.02mg/kg。

7.2.回收率

    鸡肉中乙胺嘧啶添加浓度及其回收率的实验数据：

在0.02mg/kg时，回收率为96.5%；

在0.05mg/kg时，回收率为92.0%；

在1.00mg/kg时，回收率为86.4%。

8.来源：

    SN  0690—1997