环磷酰胺对雄性生殖系统的毒副作用的综述

02(医)七任怡2002207221

摘要：通过对19年至2006年关于环磷酰胺对雄性生殖系统毒副作用资料的查阅，从环磷酰胺对生精细胞，干细胞因子，精原干细胞，精子的发生、形态，数量，以及睾丸染色体的毒副作用等方面分类进行综述，和大家共同探讨一下有关环磷酰胺的生殖毒副作用。关键词：环磷酰胺

生殖系统

毒副作用

环磷酰胺（CTX）是一种烷化剂，1958年首次人工合成，主要用于肿瘤免疫，对多种肿瘤有明显的抑制作用，对增殖细胞群的各期均有杀伤作用。进入人体后肝脏或肿瘤组织内存在的过量磷酰胺酶或磷酸酶水解，释放出氮芥基而杀伤抑制肿瘤细胞生长的作用。主要的毒性反应有恶心、食欲减退、脱发、白细胞减少、中毒性膀胱炎、肝功能损伤。我通过对资料文献的查阅发现他对雄性生殖系统有一定的毒副作用，不可忽视，故查阅19年至今文献现做综述如下：

1对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤

岳丽琴等将环磷酰胺分别作用于处于不同发育时期的1周龄、3周龄、5周龄、9周龄雄性大鼠，应用HE染色法、TUNEI法和免疫组化法检测急性期生精细胞凋亡，bcl2蛋白表达，细胞增殖能力变化及远期组织学损害结果用药后24h，除1周龄组外，各实验组生精细胞显著凋亡(P<0．()1)，bcl2蛋白表达显著下降(P2影响睾丸组织中SCF表达

代江涛等通过环磷酰胺对大鼠睾丸组织中干细胞因子的表达及增殖指数影响的研究，以探讨环磷酰胺所致生精功能损害的原因。方法：选取9天龄雄性Wistar大鼠，腹腔注射大、中、小剂量的环磷酰胺后24h、4w、8w分别采集睾丸标本，应用RT-PCR技术检测睾丸组织中SCF的表达，同时光镜下计数4w时睾丸组织的增殖指数。结果：(1)对照组随年龄的增加，睾丸组织中分泌型干细胞因子表达无显著差异(P>0．05)，膜型干细胞因子均有显著增加(P<0．05)。(2)同一时期各实验组和对照组比较，分泌型干细胞因子表达无显著差异(P>0．05)，但膜型干细胞因子表达均有显著降低(P<0．05)；同一时期各实验组间比较，随环磷酰胺剂量增加，膜型干细胞因子表达有显著降低(P<0．05)。(3)同一剂量三个时期比较，各实验组分泌型干细胞因子无显著差异(P>0．05)；膜型干细胞因子比较，大剂量组中无显著差异(P>0．05)，中、小剂量组中24h较4w、8w均有显著降低(P<0．05)，4w与8w比较无显著差异(P>0．05)。(4)增殖指数检测，4w时各实验组与对照组比较，均有显著降低(P<0．O1)，并与剂量

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负相关。结论：本研究结果提示由于环磷酰胺的毒性作用，导致了睾丸组织中膜型干细胞因子表达下调，进而影响增殖指数降低，这可能即是临床上环磷酰胺使用后产生不同程度生精功能障碍的原因之一。

3干扰精原干细胞功能

何大维等初步探讨环磷酰胺对精原干细胞分化功能的干扰作用。方法：根据Wistar大鼠生精细胞发育不同阶段分为1、3、9周龄组，每组24只，随机均分为实验组和对照组，实验组腹腔内注射环磷酰胺100mg／(kg体重)，对照组注射等量生理盐水，24h后用原位缺口末端标记法检测生精细胞凋亡。另取仅有精原干细胞的1周龄Wistar雄性大鼠60只，随机均分为实验组和对照组(给药方法同上)，在给药后24h、3周、9周分别用免疫组化法检测c-Kit蛋白，流式细胞仪分析细胞周期。结果：环磷酰胺干预后，1周龄实验组与对照组大鼠生精细胞凋亡差异无显著性(P>0．05)，其余各周龄组实验组生精细胞凋亡均显著增高(P<0．01)。I周龄实验组大鼠睾丸在环磷酰胺处理后不同时间点的细胞周期s期细胞比例、精原细胞c-Kit蛋白表达水平均明显低于对照组(P<0．01)。结论：环磷酰胺诱导精原干细胞凋亡不明显，可能更重要的是干扰精原干细胞的增殖分化功能。

4导致小白鼠精子畸形

李凤文等探讨环磷酰胺对昆明种小白鼠精子畸形的影响。方法：取小白鼠随机分成阴性对照组，CP组(分低、中、高剂量组)，经口灌胃，连灌5d，药后30天处死动物取两侧附睾液涂片，观察小白鼠精子畸形的影响。结果：CP20mg剂量组可引起精子畸形数量增加．且随着剂量加大，畸形精子数也随之增加，与阴性对照组比较，差异具有非常显著性意义(P<0．o1)；各剂量组之间进行比较，差异均同样具有显著性意义。结论：CP可引起小白鼠生殖细胞的毒作用，诱导雄性小白鼠精子畸形数量增加。

5影响小鼠精子发生

陈安等观察雄性性小鼠经腹腔注射环磷酰胺(cY)后，在不同时期其精子及睾丸组织学的变化。结果：第34、36d，精子计数下降(P<0．01)、畸形率增高(P<0．01)；第21、28、34、36d，生精细胞数均减少(P<0．05点P<0．01)；睾丸超微结构(第36d)的变化主要表现为各几级生精细胞核膜的溶解、核的破坏及精子细胞顶体囊泡的异常，但紧密连接不受影响提示CY通过对精原细胞及细线前期初级精母细胞产生毒害作用而影响精子发生。

6体外对人精子诱变性研究

李练兵等探讨环磷酰胺CP在体外测试系统中对人精子的诱变性。方法：使用不同浓度的CP与人精子和代谢活化酶作用3h再与地鼠卵体外授精，研究精子染色体和2细胞胚微桉诱变作用。结果：CP有损伤精子染色体和诱发2细胞胚徽核作用。结论：CP在代谢活化酶作用的离体测试系统中，对人精子有诱变-性，应慎用。

7诱发少精用于小鼠制造少精症模型

雷涛等通过应用环磷酰胺小鼠腹腔注射，观察发现可以影响小鼠生殖激素

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T、FSH、LH水平，致辜丸形态组织学以及理化特性的改变，引发精子发生以及成熟障碍，造成精子数目减少或质量降低甚至于无精子。

8小鼠精子形态及精细胞微核变化

贾庆军，郭魁亮等对小鼠腹腔注射环磷酰胺溶液，连续5d染毒，染毒后28d取双侧睾丸和附睾，计数小鼠精子畸形率和生殖细胞微核发生情况，评价环磷酰胺对小鼠的生殖毒性作用。结果：腹腔注射环磷酰胺实验组精子畸形率与对照组相比差异有显著性(P<0．01)；实验组生殖细胞微核率与对照组相比差异有显著性(P<0．05)。结论小鼠腹腔注射环磷酰胺对雄性小鼠生殖细胞和精子有损害作用。

9导致精液细胞形态异常1例临床资料

病人3O岁，现役军人，1988年5月在吉省某地军事训练时右小腿被虫子叮咬，月后，全身皮肤毛孔处出现小白疱，继而破淌水，经局部治疗未愈，同年lO月出现全浮肿，经当地医院检查，尿蛋白3+，红细胞满视野／HP；颗粒管型5～8／HP，诊为肾小球肾炎住院治疗。强的松60mg/d静脉滴注环磷酰胺300mg／d，持续治疗10个月。1991年5月因婚后不育查精液常规，发现70%精子无活动能力，2O%精子运不良．白细胞8～12／HP，诊断为前列腺炎口服前列康等药物1年，精液质量无改。1994年2月前来南京总医院不育专科门诊，第二性征发育正常，外生殖器未见异常，睾丸容积25m1，血液、精液抗弓形体抗体TAb)、抗精子抗体(AsAb)阴性，精液解支原体培养阴性，尿常规、血液肌酐、尿素氮等肾功能检查结果均正常，精液常规容量l，灰白色，pH6．9，精子计数25lO，活力差，活率30，顶体完整率2O，生精细胞8～l2／HP，精子运动方式呈锯齿形，运动速度18~tm／s。2精液细胞形态学检查精子形态异常以圆头、双头、多头、双尾及多尾等畸形精子为主，占85以上。生精细胞计数157个／100条精子，经分类，精原细胞0，初级精母细胞占8，次级精母细胞占6，精子细胞占86。生精细胞形态异常以变态的多核精子细胞为主要特征，这些细胞呈不规则圆形．体积较大，有的呈奇数多核，有的呈偶数多核，一般以2～7个核多见，核染色质聚集呈致密团块状，由于细胞多核异常，与细胞核伴随发育的顶体亦发生位置偏移，顶体翻转、脱落；胞质中常见空泡和同程度的细胞膜破裂等现象。10对小白鼠睾丸染色体畸变作用

阮海星等以环磷酰胺为检测剂，分别设０、１０、２０及４０ｍｇ／ｋｇｂｗ４个剂量组。经口给予成年雄性小鼠，观察对睾丸初级精母细胞染色体的影响。其结果所示：低、中剂量组对动物无明显中毒表现，但有较好剂量反应关系。高剂量组对动物有一定的毒性作用。表明用环磷酰胺作小鼠睾丸染色体试验的阳性对照物时，可参考选用２０－３０ｍｇ／ｋｇｂｗ剂量为宜。11影响小鼠附睾大头精子形发生率

王惠苏，范存欣等为了解环磷酰胺能否影响小鼠附睾头部大头形精子的发生率。将小鼠分成三组，经腹腔注射三组不同剂量口，喂养35d后处死，取双侧附睾头部分别置于lml0．9％NaCI液中，剪碎，取上清液涂片，于油镜下

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每只小鼠计数20O个精子中的大头形精子。环磷酰胺10mg组大头形精子发生率为10．8％、20mg组为8．7％、40rng组为7．9％。CP可引起附睾头部精子大头形发生率下降。

【讨论】

生殖系统对化学毒物的作用十分敏感，在其他系统还未出现毒性反应之前，生殖系统可能已受损害。已有大量的资料证实精子形态是由多基因遗传控制的，涉及多条染色体和性连锁基因?，目前认为，常染色体上的基因控制精子畸形的类型，Y．性连锁基因控制畸形精子的数量。因此，当化学物使这些基因发生突变时，就会导致精子畸形或畸形率增高]。精子畸形率的高低，可反映该化学毒物的生殖毒性和对生殖细胞潜在的致突变性。微核是细胞内染色体断裂或纺锤丝受影响而在细胞有丝后期滞留在细胞核外的遗传物质。微核试验能检测化学毒剂诱导产生的染色体完整性改变和染色体分离改变这两个遗传学终点?。生殖细胞染色体的改变势必影响精子的生成。已有大量的资料证实精子形态是由多基因遗传控制的，涉及多条染色体和性连锁基因。

CTX为细胞毒性药物，是临床常用的免疫抑制剂和抗肿瘤药，因其疗效肯定，故至今临床仍广泛应用。但CTX在治疗疾病的同时，也对正常的生精功能有毒性损害，严重者将导致不育是目前已明确可损害生精功能的化疗药之一。它不仅可杀伤分化中的精原细胞，导致长期无精或少精，而且也可在体外诱导精子染色体发生畸变，导致DNA的断裂。

通过上述资料的实验结果显示

说明环磷酰胺对小鼠精子生成有影响，提示精子的正常形成和成熟受到干扰。说明环磷酰胺对小鼠生殖细胞染色体有损害作用，在一定程度上反映环磷酰胺对雄,鼠生殖细胞的遗传损害作用。对睾丸组织中膜型干细胞因子表达下调，进而影响增殖指数降低，这可能即是临床上环磷酰胺使用后产生不同程度生精功能障碍的原因之一。同时也干扰精原干细胞的分化功能。同时对精子和染色体还有致畸作用。

由此可见，环磷酰胺的生殖毒副作用已经严重影响到人们的生活，不得不引起重视，希望大家在发挥他治疗作用的同时也兼顾他的毒副作用，从而提高大家的生活质量。

【参考文献】

1岳丽琴、李旭良、魏光辉等环磷酰胺对不同发育时期睾丸生精细胞毒性损伤的动物实验研究中华小儿外科杂志2006年1月第27卷第1期2代江涛，李旭良等，环磷酰胺对睾丸组织中SCF表达的影响及意义重庆医科大学学报2006年第31卷第3期3李凤文、刘荣珍、赵鹏、杨俊峰环磷酰胺对小白鼠精子畸形影响的探讨广西医学2003年3月第25卷第3期

4熊艾君环磷酰胺对小鼠精子发生的影响湖南中医学院学报2000年3月第2O卷第1期5贾庆军刘天鹏郭魁亮环磷酰胺对小鼠遗传和生殖毒性影响的研究(2)

对雄性小鼠生殖细胞的影响白求恩医学院学报2006年6月第4

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卷第2期

6何大维，李旭良，岳丽琴，环磷酰胺干扰精原干细胞功能的初步研究中华男科学杂志2006年5月第12卷第5期7李练兵，蔡敏，马明福，曾维三环磷酰胺体外对人精子诱变性研究中华男科学杂志2001年12月第7卷第6期8雷涛王幼黎杨华锋环磷酰胺作用于小鼠制造少精症模型的探讨陕西中医学院学报2002年第25卷第2期

9阮海星等环磷酰胺对小白鼠睾丸染色体畸变的影响《中华现代医学与临床》１０王惠苏，范存欣环磷酰胺对小鼠附睾头精子大头形发生率的影响研究《中国卫生检查杂志》２００２年８月第１２卷第４期１１《中国职业医学》２００６年１０月第３３卷第５期１２陈金娣环磷酰胺导致精液细胞形态异常１例报告

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