利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对涂阴肺结核诊断价值的评价

·临床研究·

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术

对涂阴肺结核诊断价值的评价

谭英征

1

陈双华

2

龙云铸

1

李丹1傅京力

1

周杜鹃

1

傅金球

1

1.湖南省株洲市中心医院感染内科，湖南株洲412007；2.湖南中医药高等专科学校，湖南株洲412012

[摘要]目的探讨利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术（XpertMTB/RIF）对涂阴肺结核诊断的临床价值。方

法选择2014年6~12月株洲市中心医院结核门诊涂阴肺结核病患者131例（涂阴肺结核组），肺结核确诊患者

114例（肺结核确诊组），其他肺病患者123例（其他肺病组）。对患者进行痰抗酸染色、结核菌素皮肤试验（TST）、

痰固体培养和XpertMTB/RIF检测，分析XpertMTB/RIF检测的阳性率和特异度，判断其在涂阴肺结核中的诊断价值。结果XpertMTB/RIF检测在涂阴肺结核组中阳性率为80.92%（106/131），在肺结核确诊组中为82.45%（94/114），在其他肺病组中为0.81%（1/123），涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测阳性率明显高于其他肺病组，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；涂阴肺结核中痰培养检测阳性率为71.76%（94/131），明显低于XpertMTB/

RIF检测阳性率，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论XpertMTB/RIF检测阳性率和特异性较高，对涂阴肺结核

早期诊断有重要的意义。

[关键词]结核分枝杆菌；利福平耐药实时荧光定量核酸扩增；诊断；鉴别；特异度[中图分类号]R446

[文献标识码]A

[文章编号]1673-7210（2015）10（b）-0093-04

EvaluationonthediagnosticvalueofXpertMTB/RIFtesttowardssmearnegativeplumonarytuberculosis

TANYingzheng1CHENShuanghua2LONGYunzhu1LIDan1FUJingli1ZHOUDujuan1FUJinqiu11.DepartmentofInfectiousDiseases,ZhuzhouCentralHospital,Hu'nanProvince,ZhuzhouTraditionalChineseMedicineCollege,Hu'nanProvince,Zhuzhou412012,China

[Abstract]ObjectiveToexploretheclinicalvalueofXpertMTB/RIFfortestingsmearnegativeplumonarytuberculo-sis(SNPT).MethodsFromJunetoDecember2014,368cases,including131SNPT(SNPTgroup),114pulmonarytu-berculosis(pulmonarytuberculosisgroup)and123otherkindsofpulmonarydisease(otherpulmonarydiseasegroup)inTuberculosisClinicofZhuzhouCentralHospitalweredetectedofanti-acidstaintest,tuberculinskintest(TST),spu-tumculturetestandXpertMTB/RIF.ThepositiveratesandspecificityofXpertMTB/RIFtestdeterminingthediagnos-ticvalueofSNPTwereanalyzed.ResultsThepositiverateofXpertMTB/RIFtestwas80.92%(106/131)inSNPTgroup,82.45%(94/114)inpulmonarytuberculosisgroupand0.81%(1/123)inotherpulmonarydiseasegroup.Theposi-tiverateofXpertMTB/RIFtestinSNPTgroupwasobviouslyhigherthanthatinotherpulmonarydiseasegroup,andthedifferencewasstatisticallysignificance(P<0.01).ThepositiverateofsputumculturetestinSNPTgroupwas71.76%(94/131),whichwasobviouslylowerthanthatofXpertMTB/RIF,andthedifferencewasstatisticallysignifi-cance(P<0.05).ConclusionThepositiverateandspecificityofXpertMTB/RIFtestarehigh,whichhasimportantsignificanceonearlydiagnosisofSNPT.

[Keywords]Mycobacteriumtuberculosis;XpertMTB/RIF;Diagnosis;Identify;Specificity

412007,China;2.Hu'nan

近年来，结核患者日益增多，目前肺结核的实验诊断主要应依靠痰涂片找抗酸杆菌、结核菌素皮肤试验（tuberculinskintest，TST）及痰培养。因痰涂片对痰液标本内结核杆菌含量要求高，达到一定浓度方能检[作者简介]谭英征（1980.12-），男，硕士，副主任医师，主要

从事感染性疾病的临床工作。

测阳性，涂阴肺结核患者往往因为痰涂片抗酸染色阴性，临床上不易早期发现，常被延误治疗。TST是个操作简单、方便、快捷的筛查结核的免疫学方法，在临床上应用广泛，但有较高的假阳性和假阴性率，对结核感染与卡介苗接种后感染无法鉴别，降低了它的临床价值[1]。痰液结核杆菌培养是诊断结核病的金标准，但

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·临床研究·

结核杆菌生长缓慢，培养周期长，且对实验室生物安全级别要求高，故传统的临床诊断涂阴肺结核试验方法有限。因此，寻找一种能快速、敏感诊断涂阴肺结核的实验技术十分重要。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增（XpertMTB/

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100%；阴性预测值=真阴性人数/（真阴性人数+假阴

性人数）×100%。

1.3.1TST试验吸取试剂5U（0.1mL）注入前臂内侧

上中1/3交界处皮内，形成皮丘。经72h观察注射部位反应，考虑到现代人卡介苗接种率高，本研究以硬结的横径及纵径平均≥10mm为阳性。

RIF）检测技术对结核杆菌具有较高的敏感性和特异

度[2]。本研究通过对131例涂阴肺结核和123例其他肺病患者进行XpertMTB/RIF检测，探讨XpertMTB/

1.3.2痰固体培养痰培养采用4%氢氧化钠处理分离

培养。吸取痰标本到前处理管中，加入4%氢氧化钠前处理液充分混匀，静置15min后取吸管吸取前处理液均匀接种在培养基斜面上，观察培养情况，记录生长结果[4-5]。

RIF在涂阴肺结核快速、早期诊断中的临床价值。1资料与方法1.1一般资料

选择2014年6~12月到株洲市中心医院（以下简称“我院”）结核门诊就诊患者为研究对象。入选涂阴肺结核患者131例（涂阴肺结核患组），年龄18~82岁，平均（41.2±15.3）岁；肺结核确诊患者114例（肺结核确诊组），年龄21~79岁，平均（39.6±16.5）岁；其他肺病患者123例（其他肺病组），年龄17~78岁，平均（40.4±17.5）岁。该研究经我院医学伦理委员会批准，所有参与研究者均签署了知情同意书。

1.3.3XpertMTB/RIF检测取1mL痰液标本与含

氢氧化钠及异丙醇的处理液按1∶2比例混合，在涡旋震荡器上震荡15~30s，室温静置15min。取混合液

2mL转移至一次性多室塑料反应盒中，然后将反应

盒放置到检测模块中，仪器进行自动化分析，约2h后可读取结果[6]。

1.4统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用

1.2诊断标准

1.2.1入选标准肺结核确诊患者除有发热、咳嗽、咳

痰、盗汗等临床表现及影像学资料支持外必须有痰结核分枝杆菌培养结果。涂阴肺结核诊断标准：①具有午后低热、咳嗽、咯血、盗汗、乏力等典型肺结核临床症状及肺部CT表现者；②痰涂片抗酸染色阴性者；

t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果

2.1XpertMTB/RIF在肺结核确诊组与其他肺病组

的检测情况比较

通过检测发现XpertMTB/RIF检测在肺结核确诊组中为82.45%（94/114），在其他肺病组中为0.81%（1/123），肺结核确诊组中XpertMTB/RIF检测阳性率明显高于其他肺病组，差异有高度统计学意义（P＜

③支气管或肺部组织病检支持结核性改变者；④诊断

性抗结核治疗2个月后症状改善，复查CT提示有好转者[3]。

1.2.2排除标准①影像学不典型者行支气管镜检查

或病理检查明确为非结核感染者；②仍不能明确者行诊断性抗结核治疗2个月后症状及影像学病变无改善者。③常规行痰涂片、痰固体培养，排除结核感染者。

0.01）。XpertMTB/RIF检测对肺结核确诊组的阳性预

测值为98.95%（94/95），阴性预测值85.92%（122/142）。

2.2XpertMTB/RIF、TST在涂阴肺结核组与其他肺

病组的检测情况比较

涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测阳性率为

1.2.3其他肺病者包括肺病肿瘤（25例）、普通肺炎

（53例）、支气管扩张（15例）、慢性阻塞性肺疾病（26例）肺部其他疾病（4例）。

80.92%（106/131），其他肺病组中XpertMTB/RIF检测

阳性率为0.81%（1/123）。涂阴肺结核组中XpertMTB/

1.3研究方法

对所有入选患者均进行TST、痰固体培养和Xpert

RIF检测阳性率明显高于其他肺病组，差异有高度统

计学意义（P＜0.01）。涂阴肺结核组中TST检测阳性率为.%（85/131），与涂阴肺结核组中XpertMTB/

MTB/RIF检测。TST所用试剂购自北京高科技生命科

技开发有限公司，痰固体培养基为罗氏培养基，由珠海贝索公司生产，XpertMTB/RIF仪器及试剂由美国

RIF检测阳性率80.92%比较，明显低于涂阴肺结核

组中XpertMTB/RIF检测阳性率，差异有高度统计学意义（P＜0.01）。XpertMTB/RIF检测对涂阴肺结核的阳性预测值为99.07%（106/107），阴性预测值

Cepheid公司研发生产，均在有效期内使用。特异度=

真阴性人数/（真阴性人数+假阳性人数）×100%；阳性预测值=真阳性人数/（真阳性人数+假阳性人数）×

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是将样品的准备、定量PCR扩增和荧光检测集于一体的核酸扩增检测分析系统。操作简单，无需太多培训，只需要在标本盒中加入待检测标本，系统可自动

阴性83.00%（122/147）。见表1。

表1

组别涂阴肺结核组（n=131）其他肺病组（n=123）合计两组XpertMTB/RIF、TST检测结果（例）

XpertMTB/RIF阳性阴性阳性TST85361214687133完成标本纯化、离心、DNA提取、DNA特异序列检测，

1061107251221472h内便可得到检测结果[14]，封闭性好，不易造成交叉

污染，对涂阴肺结核患者的敏感度高[15]。多中心研究证实XpertMTB/RIF检测敏感度与特异度高、耗时短，被世界卫生组织为遏制结核病推荐的检验方法[16]。本研究中对131例涂阴肺结核组患者痰液予Xpert

注：XpertMTB/RIF：利福平耐药实时荧光定量核酸扩增；TST：结核菌素皮肤试验

2.3XpertMTB/RIF、痰培养在涂阴肺结核与其他肺病

组的检测情况比较

涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测阳性率为

MTB/RIF检测，阳性率为80.92%（106/131），肺结核确

诊组中XpertMTB/RIF检测阳性率为82.45%（94/

114），两者阳性率均高，差异无统计学意义（P＞0.05）。

其他肺病组中XpertMTB/RIF检测阳性率为0.81%（1/123）。涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测阳性率明显高于其他肺病组，差异有高度统计学意义（P＜

80.92%（106/131），痰培养检测阳性率为71.76%（94/131）。

涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测阳性率明显高于痰培养检测阳性率，差异有统计学意义（P＜0.05）。涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测特异度为

0.01）。提示XpertMTB/RIF检测对肺结核患者有较高

的敏感性。

99.19%（122/123），与涂阴肺结核组中痰培养检测特异

度100.00%（123/123）相比，差异无统计学意义（P＞

TST是结核感染诊断的一个重要参考指标[17]，将结

核杆菌产物注入体表，如受试者感染了结核分枝杆菌，则形成超敏反应性炎症，出现红肿、硬结[18]。临床使用非常广泛，但其特异性受到接种卡介苗和非结核分枝杆菌的影响，且有较多的假阴性，临床意义有限[19]。本

0.05）。见表2。

表2

组别涂阴肺结核组（n=131）其他肺病组（n=123）合计两组XpertMTB/RIF、痰培养检测结果（例）

XpertMTB/RIF阳性阴性阳性痰培养阴性1061107251221479409437123160研究中对涂阴肺结核组患者中行TST检测，阳性率为

.%（85/131），与涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检

测阳性率（80.92%）比较，明显低于涂阴肺结核组中

注：XpertMTB/RIF：利福平耐药实时荧光定量核酸扩增

XpertMTB/RIF检测阳性率，差别有统计学意义（P＜0.01）。XpertMTB/RIF检测对肺结核确诊组的阳性预

测值为98.95%，阴性预测值为85.92%；对涂阴肺结核的阳性预测值为99.07%，阴性预测值为83.00%。说明对怀疑涂阴肺结核患者行XpertMTB/RIF检测对诊断有较大帮助。痰结核杆菌培养是结核病诊断金标准，本研究中，涂阴肺结核组中痰培养检测阳性率为

3讨论

肺结核是世界上致死率最高的传染性疾病之一，随着社会老龄化，肺结核患者逐年增加[7-9]。目前我国肺结核实验室常规检查方法是痰涂片找抗酸杆菌，其耗时短、花费小，但检查敏感度低、对标本含菌量高，致使很多涂阴肺结核患者漏诊[10]。痰培养结核杆菌是结核诊断的金标准[11]，但痰培养方法存在周期长、敏感度相对低，对实验室的生物安全要求高，耗时长，不易普及[12]，造成涂阴肺结核临床诊断困难、治疗延误。早诊断、早治疗涂阴肺结核患者对控制结核病的传播、减少结核耐药，具有十分重要的社会意义。因此临床上亟需开发出一种快速、准确、安全的诊断方法。

71.76%（94/131），与XpertMTB/RIF检测阳性率[80.92%（106/131）]比较，痰培养检测阳性率明显低于XpertMTB/RIF检测阳性率，差异有统计学意义（P＜0.05）。涂阴肺结核组中XpertMTB/RIF检测特异度高

达99.19%（122/123），与涂阴肺结核组中痰培养检测特异度[100.00%（123/123）]比较，差异无统计学意义（P

＞0.05）。但痰培养对实验室生物安全级别要求高，不

能常规开展，且耗时长，培养周期为6~8周，不利于患者的早期合理治疗[20]。XpertMTB/RIF检测自动化程度高，唯一手动操作就是将标本置入一次性标本盒内，检测报告时间2h，比痰培养节省甚多时间[21]。

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XpertMTB/RIF检测法是利福平耐药实时荧光定

量核酸扩增检测技术，采用Cepheid公司GeneXpert检测系统，针对rpoB基因81bp利福平耐药核心区间（RRDR）设计引物、探针，检测其是否发生突变[13]，它

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·临床研究·

XpertMTB/RIF检测是一种简便、快捷、准确的检

测方法[22]，综合国内外的诊治报道[23-27]进展，临床应用高于TST、痰培养，可更好地辅助临床医师对涂阴肺结核患者进行早期诊断和治疗，为结核病的控制、预防提供了有力的帮助，值得临床推广。

196.

中国医药导报2015年10月第12卷第29期

[15]郑志刚.XpertMtb/RIF检测结核杆菌和利福平耐药的

研究及应用进展[J].应用预防医学，2014，20（2）：120-

121.

[16]宋世森．利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术检

测菌株和痰标本的结果分析[J]．结核病与肺部健康杂志，2014，3（2）：110-111．

[参考文献]

[1]朱春玲，候远沛，彭素真，等.γ-干扰素体外释放试验在结

核诊断中的应用评价[J].临床肺科杂志，2014，19（10）：

[17]赵红梅，张放.结核分枝杆菌特异性抗原检测在临床诊

断中的意义[J].中国卫生标准管理，2015，6（1）：36-37.

1833-1844.

[2]VadwaiV，BoehmeC，NabetaP，etal．XpertMTB/RIF：anew

pillarindiagnosisofextrapulmonarytuberculosis?[J]．JClinMicrobiol，2011，49（7）：20-25.

[3]李红，唐神结，史祥，等.全血γ-干扰素释放试验对涂阴

肺结核诊断价值的研究[J].中华临床医师杂志：电子版，

[18]李卫彬，候琰，程新征.结核菌素试验的临床应用进展[J].

临床肺科杂志，2014，19（4）：737-738.

[19]葛燕萍，肖和平.γ-干扰素释放试验与结核菌素皮肤试

验辅助检测肺外结核病的比较[J].中国防痨杂志，2014，

36（3）：194-196.

[20]王震，龚玉华，钱彩娣，等.5种结核杆菌检测方法的临

床应用价值[J].检验医学与临床，2015，12（3）：334-335.

2012，6（16）：44-45.

[4]中国防痨协会基础专业委员会．结核病诊断实验室检验

规程[S].北京：中国协和医科大学出版社，2006.

[21]赵冰，欧喜超，夏辉.XpertMtb/RIF检测技术在结核病

诊断中的应用评价[J].中国防痨杂志，2014，36（6）：462-

[5]赵雁林，王黎霞.结核分枝杆菌药物敏感性实验标准化

操作程序及质量保证手册[S].北京：人民卫生出版社，

4.

[22]尹青琴，申阿东.XpertMtb/RIF试验在结核病诊断中的

研究现状[J].中华结核和呼吸杂志，2012，35（5）：363-

2013.

[6]张治国，欧喜超，孙倩，等．利福平耐药实时荧光定量核

酸扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌及其耐药性的研究[J]．中国防痨杂志，2013，35（1）：13-14.

365.

[23]SachdevaKS，RaizadaN，SreenivasA，etal.UseofXpert

MTB/RIFindecentralizedpublichealthsettingsanditsef-fectonPulmonaryTBandDR-TBcasefindinginIndia[J].PLoSOne，2015，10（5）：e0126065.

[24]RabnaP，RamosJ，PonceG，etal.DirectDetectionby

theXpertMTB/RIFAssayandCharacterizationofMultiandPolyDrug-ResistantTuberculosisinGuinea-Bis-sau，WestAfrica[J].PLoSOne，2015，10（5）：e0127536.[25]IramS，ZeenatA，HussainS，etal.Rapiddiagnosisof

tuberculosisusingXpertMTB/RIFassay-Reportfromadevelopingcountry[J].PakJMedSci，2015，31（1）：105-110.

[26]PhoMT，DeoS，PalamountainKM，etal.Optimizingtubercu-losiscasedetectionthroughanoveldiagnosticdeviceplacementmodel：thecaseofUganda[J].PLoSOne，2015，10（4）：e0122574.

[27]McNerneyR，CunninghamJ，HeppleP，etal.Newtubercu-losisdiagnosticsandrollout[J].IntJInfectDis，2015，32：81-86.

（收稿日期：2015-05-25本文编辑：关婧）

[7]全国第五次结核病流行病学抽样调查技术指导组，全

国第五次结核病流行病学抽样调查办公室.2010年全国第五次结核病流行病学抽样调查报告[R].中国防痨杂志，2012，34（8）：485-508.

[8]张蕴淑，侯琰.延续性护理干预对提高肺结核患者认知

效果的影响[J].中国医药科学，2012，2（11）：102-103.

[9]彭朝荣.老年性肺结核50例临床分析[J].中国医药科

学，2012，2（19）：163-1.

[10]郑惠聪，陈益彪.涂阴肺结核的诊断与治疗[J].临床肺

科杂志，2012，17（5）：941-942.

[11]李艳英.56份结核杆菌涂片与培养的对比分析[J].临床

肺科杂志，2011，16（10）：15-16.

[12]刘家云，郝晓柯.结核病实验室诊断方法新进展[J].临

床检验杂志，2013，31（2）：115-116.

[13]邹远妩，刘尚武，朱蕾.XpertMtb/RIF检测结核分枝杆

菌及其耐药性在结核病辅助诊断中的临床价值[J].临床肺科杂志，2015，20（3）：568-570.

[14]杨藴华，韩中波.XpertMtb/RIF技术在结核病诊断及耐

药检测中的应用[J].中国实用医药，2015，10（7）：195-

96CHINAMEDICALHERALDVol.12No.29October2015