临床和实验医学杂志２０１０年１月 第９卷 第１期 ・６ｌ・ 酵母样真菌５６株的分离鉴定及药物敏感性分析 陈春华 陈淑勉【摘要】 目的赵义刚 雷德龙（伊犁州奎屯医院检验科伊犁８３３２００） 对１ １００例标本中分离出的５６株酵母样真菌进行菌种鉴定及常用抗真茵药物的敏感性分析，以指 用常规培养方法从临床标本中分离出的５６株酵母样真菌用柯玛嘉显色培养基纯培养，根据菌 导临床合理用药。方法分析。结果落颜色进行分类，可疑者在法国ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ的ＶＩＴＥＫ一３２全自动细菌分析仪上鉴定，用ＡＴＢ ＦＵＮＧＵＳ ２ ＩＮＴ试条做药敏 ５６株酵母样真菌中，白色假丝酵母茵检出率最高（７５．０％），其次为热带假丝酵母菌（１４．３％），光滑假丝 酵母茵（７．１％），检出葡萄牙假丝酵母茵、郎比可假丝酵母菌各１株。酵母样真菌对５一氟胞嘧啶（５一Ｆｃ）、两性菌素Ｂ （ＡＭＢ）、氟康唑（ＦＣＡ）、依曲康唑（ＩＴＲ）、伏立康唑（ＶＲＣ）的敏感性分别为１００％、１００％、２３．２％、１７．９％和２８．６％。结 论临床酵母样真菌感染以白色假丝酵母茵为主，对５一氟胞嘧啶、两性菌素Ｂ敏感性较高，对氟康唑、依曲康唑、伏立 康唑有不同程度的耐药，因此，临床上必须重视真菌的检出和药敏试验。临床医生应根据药敏结果合理使用抗真菌药 物。 【关键词】 酵母样真菌抗真菌药物敏感性 近年来，随着广谱抗生素、激素、免疫抑制剂的广泛 应用，导管插管、器官移植和其他介入性治疗的普遍开 展，以及供精人工授精（ＡＩＤ）患者的不断增加，由真菌 引起的条件致病菌感染日益增多 Ｊ。为了解酵母样真 菌感染的菌群分布及药敏状况，现对我院２００９年１～４ 纯培养，接种于柯玛嘉显色培养基，不同种类念珠菌菌 落颜色不同，可用于鉴定常用的念珠菌，如白念珠菌、热 带念珠菌和克柔念珠菌 。也可用于初代培养，有研究 显示对咽部、尿液和生殖道的标本进行培养 Ｊ，显色培 养基培养阳性率高于沙氏培养基，并且区分混合感染的 月１ １００份临床标本中分离出的５６株酵母样真菌进行 能力更强。２７℃培养２４ ｈ，如为绿色或翠绿色则进一步 鉴定和药敏分析，从而指导临床合理使用抗真菌药物， 做芽管试验，若芽管试验阳性则为白色假丝酵母菌，若 有效预防真菌感染和耐药性发生。 芽管试验阴性或在柯玛嘉培养基上为白色，则取纯种菌 ｌ 材料和方法 落用鉴定板配套培养液调匀经比浊仪把菌液调到２．０ 麦氏浓度，在法国ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ的ＶＩＴＥＫ一３２全自动细菌 分析仪上充液，上机进一步鉴定并报告。从柯玛嘉显色 培养基挑取不超过４ ｄ的菌落制备成２．０麦氏浓度的悬 浮液，用加样器吸取２０ ｌ该菌悬液到ＡＴＢ Ｆ２培养基 的安瓶中，用加样器混匀ＡＴＢ Ｆ２培养基，并在每个杯状 １．１菌株来源２００９年１—４月我院各科送检的各类 标本１ １００份临床标本中分离出的５６株酵母样真菌。 其中痰标本３７例，中段尿４例，血液标本４例，导管尖 端物２例，耳分泌物６例，口腔分泌物２例，伤口脓液１ 例。 １．２试剂和仪器购自郑州博赛生物技术股份有限公 司的柯玛嘉培养基干粉自制念珠菌显色培养基，ＡＴＢ ＦＵＮＧＵＳ ２ ＩＮＴ试条做药敏分析，法国ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ的 ＶＩＴＥＫ一３２全自动细菌分析仪，与之配套的比浊仪和真 菌ＶＩＴＥＫ—ＹＢＣ鉴定卡，上海求精生化试剂仪器有限公 凹孔（含有５种抗真菌的药物）中加入１３５ ｔｘｌ的ＡＴＢ １７２ 培养液（大约４ Ｘ １０ 酵母菌／杯状凹孔），在有氧条件下 ３５ｃＣＩ培养２４ ｈ，如果在生长对照杯生长不充分，经２４ ｈ 培养后，很难或是不可能对试条进行判读，应该在同样 的环境下再培养２４ ｈ。通过肉眼判读观察生长情况，与 司生产的５０～２５０ ｌ加样器。３７℃培养箱、２７℃培养 生长对照相比较，依照说明书判读并记录药敏结果。用 箱。 克柔念珠菌ＡＴＣＣ６２５８菌株作质控菌株。 １．３ 方法我院各科送检的各类标本接种于血培养基 ２结果 上，３７％培养２４ ｈ后，发现有酵母样菌落时，挑取菌落 １ １００份临床标本中分离出的５６株酵母样真菌。 采用直接镜检的一般方法 Ｊ，检查时应遮去强光，先在 其中痰标本３７例，中段尿４例，血液标本４例，导管尖 低倍镜下检查有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子 端物２例，耳分泌物６例，口腔分泌物２例，伤口脓液１ 和菌丝的形态、特征、位置、大小和排列等，也可涂在载 例。５６株酵母样真菌中，白色假丝酵母菌检出率最高 玻片上，空气干燥后，经革兰染色等方法染色后观察。 （７５．０％），其次为热带假丝酵母菌（１４．３％），光滑假丝 革兰染色中真菌为阳性，被染成蓝黑色，此方法适用于 酵母菌（７．１％），检出葡萄牙假丝酵母菌、郎比可假丝酵 酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌检测 ｊ。肺孢子菌感染 的痰或支气管肺泡灌洗液涂片检查可用此染色方法，可 母菌各１株。见表１。酵母样真菌对５一氟胞嘧啶（５一 以见到染成黑色的包囊体和滋养体 ，证实为真菌则分 ＦＣ）、两性菌素Ｂ（ＡＭＢ）、氟康唑（ＦＣＡ）、依曲康唑 （ＩＴＲ）、伏立康唑（ＶＲＣ）的敏感性分别为１００％、１００％、 通讯作者：陈春华Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｃｈｃｚｓｙ＠１２６．ｃｏｒｎ ２３．２％、１７．９％和２８．６％。见表２。 ・６２・ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＣｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏ１．９，Ｎｏ．１ Ｊａｎ．２０１０ 表ｌ ５６例标本检出真菌菌种种类（株） 广泛应用的原因。应注意的是，光滑假丝酵母菌对ＦＣＡ 几乎天然耐药［＿１。。，这与我们的实验结果相符。ＶＲＣ、 ＦＣＡ，ＩＴＲ同属咪唑类抗真菌药，其抗真菌谱基本相似， 对浅表性真菌感染与系统性真菌感染病均具有良好的 治疗作用。近年来有文献报道念珠菌对ＦＣＡ耐药呈上 升趋势 １ｌＩ Ｊ，主要为热带念珠菌和克柔念珠菌，本实验 中有８株热带念珠菌，有６株（６／５６为１０．７％）对ＦＣＡ 表２ ５６株酵母样真菌的药敏试验结果 （株） 耐药，２株中敏。 另外，开展体外药物敏感性试验的目的在于指导临 床合理用药，反映抗真菌治疗的疗效。有研究表明＿ｌ ， 对于体外药敏试验结果提示敏感的真菌（大部分为念珠 菌，其余为新生隐球菌和组织胞浆菌），有９１％对治疗 反应良好，而体外药敏试验结果提示耐药者仍然有 ４８％对治疗反应良好。目前国际上有一个比较公认的 原则 ，ＦＣＡ对念珠菌，可以借鉴细菌药敏试验时的 ３讨论 “９Ｏ一６０”原则，即体外药敏试验结果敏感者约有９０％ 随着高效广谱抗生素的广泛应用，抗肿瘤治疗的深 临床疗效较好，而体外药敏试验结果耐药者约有６０％ 入开展，器官移植和外科其他介入性治疗的不断实施， 仍然将对治疗有效 。这一提议，为解释体外药敏试 皮质类固醇激素的广泛应用，以及获得性免疫缺陷综合 验和临床疗效之间的相关性，提供了指导。 征（ＡＩＤＳ）患者的不断增多，侵袭性真菌感染呈现上升 趋势，且病情严重，念珠菌已经成为引起血行感染的第 参考文献 ［１］陈民钧，王辉．中国重症监护病房革兰阴性菌耐药性连续７年监测 ４位的病原菌，侵袭性曲霉菌病已经成为白血病和骨髓 研究［Ｊ］．中华医学杂志，２００３，８３（５）：３７５—３８１． 移植受者等重症免疫受损，机体发生死亡的主要原 ［２］ 王端礼，李若瑜，王爱平．医学真菌学一实验室检验指南［ｓ］．北 京：人民卫生出版社，２００５． 因 Ｊ。分离的５６株酵母样真菌中，白色假丝酵母菌 有４２株，检出率最高（７５．０％），这可能与其毒素黏附力 较强有关，其次为热带假丝酵母菌（１４．３％），光滑假丝 酵母菌（７．１％），检出葡萄牙假丝酵母菌、郎比可假丝酵 母菌各一株。另外，还分离出了较少见的曲霉菌。非白 色假丝酵母菌感染比例有所上升＿８ Ｊ，这可能与氟康唑的 选择压力有关。引起人类感染的真菌主要是假丝酵母 ［３］余进，李若瑜．医学真菌实验室常规检查方法［Ｊ］．中华检验医学 杂志，２００９，３２（１）：１１４—１１６． ［４］安春丽，王本颖，魏金荣．检测卡氏肺孢子虫的快速银染法［Ｊ］． 中国寄生虫病防治杂志，１９９９，１２（１）：ＷＯＯ４． ［５］Ｍｕｒｒａｙ ＭＰ，Ｚｉｎｅｈｕｋ Ｒ，Ｌａｒｏｎｅ ＤＨ．ＣＨＲＯＭａｇａｒ Ｃａｎｄｉｄａ ａｓ ｔｈｅ ｓｏｌｅ ｐｒｉｍａｒｙ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｙｅａｓｔｓ ａｎｄ ａｓ ａ ＳＯＵＤＣｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ—ａｓｓｉｍｉｌａｔｉｏｎ—ｏｆ—ｔｒｅｈａｌｏｓｅ ｔｅｓｔｌ Ｊ】．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００５，４３ （３）：１２１０—１２１２． 菌，而白色假丝酵母菌是最常见的条件致病菌，当人体 ［６］ Ｖａｒｔｉｖａｒｉａｎ ＳＥ，Ａｎａｉｓｓｉｅ ＥＪ，Ｂｏｄｅｙ ＧＰ．Ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｆｕｎｇａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｉｎ ｉｍｍｕｎｏｅｏｍｐｍｍｉｓｅｄ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ｃｌａｓｓｉｉｆｃａｔｉｏｎ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ ｍａｎａｇｅ・ 抵抗力下降时，容易引起假丝酵母菌病。从５６株酵母 样真菌中的分布可以发现，酵母样真菌感染主要侵袭呼 吸道（３７／５６为６６．１％），其次是泌尿生殖道和血液（４／ ５６为７．１％），这与近年来肺部假丝酵母菌感染明显增 多的报道一致 Ｊ，应引起临床医生的重视，在对患者治 ｍｅｎｔ［Ｊｊ．Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，１９９３，１７ Ｓｕｐｐｌ ２：￥４８７—４９１． ［７］ Ｅｄｍｏｎｄ ＭＢ，Ｗａｌｌａｃｅ ＳＥ，ＭｃＣｌｉｓｈ ＤＫ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｓｏｃｏｍｉｌａ ｂｌｏｏｄｓｔｒｅａｍ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｈｏｓｐｉｔａｌｓ：８ ｔｈｒｅｅ—ｙｅａｒ ａｎａｌｙｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｆｅｃｔｎ Ｄｉｓ，１９９９，２９（２）：２３９—２４４． ［８］扬锦江，李向阳，张楚南．新生儿败血症的病原菌及耐药性分析 ［Ｊ］．中华医院感染学杂志，２００３，１３（６）：５７２—５７４． ［９］单才华，贺奇超．ｓｂＪＬ葡萄球菌败血症的细菌学分类及抗生素耐 药性分析［Ｊ］．中华医院感染学杂志，２００１，１ｌ（６）：４０１—４０３． ［１Ｏ］谢国艳，蔡志昌，周建华，等．临床感染深部真菌的分离鉴定和药 敏结果分析［Ｊ］．检验医学，２００４，１９（２）：１２２—１２４． ［１１］谢灵，周贵民，呈坚．酵母菌对抗真菌药的耐药性［Ｊ］．中华内科 杂志，１９９５，３４（４）：２６６． 疗效果不佳时，应考虑到真菌感染的可能。本组资料显 示，５６株酵母菌样真菌对５一ＦＣ、ＡＭＢ敏感率高达 １００％，而对ＶＲＣ（２８．６％）、ＦＣＡ（２３．２％）、ＩＴＲ（１７． ９％）敏感性较低，其原因可能与药物的用药机会有关。 ＡＭＢ可致寒战、发热，并且有严重的心肾毒性，临床应 用受到一定，这可能是敏感性较高的原因，但由于 其抗菌谱广，仍然是目前治疗深部真菌感染较好的药 物。５一Ｆｃ敏感性高的原因可能是其抗菌范围较窄，用 量大，疗程长，单独使用容易产生耐药，临床较少使用； 该药一般应与ＡＭＢ联合使用。ＶＲＣ、ＦＣＡ，ＩＴＲ敏感性 较低，可能因其抗菌谱广、毒性低、半衰期长，在临床上 ［１２］周兵，陈大妹，刘海云，等．２６２株酵母样真菌的药敏试验结果 ［Ｊ］．临床检验杂志，２０００，１８（２）：ｌｌ１． ［１３］Ｒｅｘ ＪＨ，Ｐｆａｌｌｅｒ ＭＡ．Ｈａｓ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｃｏｍｅ ｏｆ ａｇｅ？ ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｆｎｅｃｔ Ｄｉｓ，２００２，３５（８）：９８２—９８９． ｆ １４ ｆ Ｈｏｓｐｅｎｔｈａｌ ＤＲ，Ｍｕｒｒａｙ ＣＫ，Ｒｉｎａｌｄｉ ＭＧ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ ＳＵＳ－ ｅｅｐｆｉｂｉｌｉｔｙ ｔｅｓｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｃａｎｄｉｄｉａｓｉｓ［Ｊ］．Ｄｉａｇｎ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｉｎ－ ｆｅｅｔ Ｄｉｓ，２００４，４８（３）：１５３—１６０． （收稿日期：２００９—１０—２８）
