荧光共振能量转移动态检测蛋白质相互作用的研究进展

：／ｄｏｉ１０．３９６９９７６０．２０１２．０１．０２０．ｉｓｓｎ．１０００－ｊ

，ＪＪｉｎｉｎＭｅｄＵｎｉｖＦｅｂｒｕａｒ２０１２，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１　　ｇｙ　　

·综述·

荧光共振能量转移动态检测蛋白质相互作用的研究进展

王　宏１　蔡　欣１　白　波２　陈　京２Δ

１泰山医学院基础医学院，２济宁医学院神经生物学研究所，（）山东泰安２山东济宁２７１０１６；７２０６７

技术是近１ＦＲＥＴ）０年来出现的一种新的检测蛋白质－蛋白质相互作用的技　　摘　要　荧光共振能量转移（

术。它的最大优势是能从“时间、空间、动态、连续”对活细胞中蛋白质之间的相互作用进行检测，该技术不但可以与其他技术结合来研究细胞膜上蛋白质之间的相互作用；而且还可用于分析细胞膜－细胞质－细胞核中所发生这对于疾病发病机的信号转导途径。资料显示，ＦＲＥＴ技术所发挥作用是最近出现的几种技术所无法企及的，制的研究及新的药物靶点的发现具有深远意义。

关键词　荧光共振能量转移；蛋白质－蛋白质相互作用；信号转导

（）中图分类号：Ｑ２７４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１０００９７６０２０１２０２０６００４－－－　　机体细胞中种类繁多的蛋白质各具不同的生

从而使细胞对胞外信号做出不同的生物学理功能，

反应。蛋白质的功能作用经常受不同条件下与不同配体间相互作用的调节。蛋白质之间的相互作用能够整合来自不同信号通路的信号并协调细胞

１］

。因此，研究蛋白质之间相互作内部的调节机制［

技术的原理１　荧光共振能量转移（ＦＲＥＴ）ＦＲＥＴ理论描述的是两个荧光团之间的能量

）。在能量传输过程中，转移（图１其中的一个荧光，团作为能量供体（另一荧光团作为能量受体Ｄ）

（。以适当的激发光照射Ｄ，将会产生振荡偶极Ａ）

子，如果Ｄ的基态和Ａ的第一激发态的振动能量差相当，或者Ｄ的发射光谱与Ａ的吸收光谱能有效重叠时，当Ｄ与Ａ靠近时，或者说Ｄ与Ａ的偶极子之间的距离足够近时即能产生共振，通过偶极－偶极耦合作用将能量从Ｄ向Ａ转移，即发生非放射能量共振转移；Ａ接受能量从而发射出特异性荧光。在此共振能量转移过程当中，Ｄ特异性荧光的衰减或者Ａ特异性荧光的增强即可被检测

［］

从而实现Ｆ到，ＲＥＴ检测４。ＦＲＥＴ中两个常用的荧光蛋白为青色荧光蛋

，白（和黄色荧光蛋ｃａｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｒｏｔｅｉｎＣＦＰ）　　ｙｐ，。Ｆ白（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔＹＦＰ）ＲＥＴ具ｅｌｌｏｗｒｏｔｅｉｎ　　ｙｐ

在蛋白质、有广泛的应用前景，ＤＮＡ等复合物的研

［］

究方面发挥重要作用。Ｋｈａｎ等５用ＦＲＥＴ检测

用能够给这些研究提供新的见解。在过去的２０年中，已经开发了很多用于探测蛋白质相互作用的技）术和方法，这些技术一般分为两部分，体外方法，１、例如免疫共沉淀、ｆａｒｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔＧＳＴ融合蛋白－ｗ　）沉降技术等；体内方法，例如酵母双杂交系统，但２是这些方法都具有一定的局限性。一方面，基于机离心力高的或去垢剂的细胞裂解，上述方法械的、

都可能会改变蛋白质－蛋白质相互作用的自然状态；另一方面，上述技术无法提供活细胞内的特定蛋白间相互作用的时空信息

［２］

。近年来研究开发

的荧光共振能量转移（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎ　　－，却能克服以上缺点，可以在ｅｒｔｒａｎｓｆｅｒＦＲＥＴ）ｇｙ　

活细胞中实时动态观测蛋白质之间的相互作用。

［］

更重要的是，如ＦＲＥＴ还可以与其他技术结合３，

、生物发光共振能量转移（蛋白互补技术ＢＲＥＴ）（）等，既能研究两个蛋白之间的相互作用，还ＰＣＡｓ

能用来研究３个或更多蛋白之间的相互作用，甚至是对信号网络的研究。本文就ＦＲＥＴ、ＦＲＥＴ与其他一些技术的结合及其应用做一简要综述。

基金项目］国家自然科学基金资助项目（３０９７１０８１；３０８７０９３２；＊［

）；山东省自然科学基金资助项目（８１０７０９６１Ｎｏ．

）；山东省泰山学者专ＺＲ２０１１ＣＭ０２７；ＺＲ２００９ＤＺ００４

项基金

：通信作者］陈京，Ｅ－ｍａｉｌｉｎｃｈｅｎ＠ｗａｒｗｉｃｋ．ａｃ．ｕｋ△［ｊｇ

出溶血磷脂胆碱能够通过迅速磷酸化和内化来快／速激活Ｇ２Ａ，Ｇ２Ａ的活化能促使Ｇｉ１和Ｇ１１α－αｑ／和ＧＧｉ１和Ｇ１１会使胞质内的γ的释放，α－αｑβ

２＋

浓度升高及ＧＣａ２Ａ的激活促使ＧＲＫ６和βａｒ－－而Ｇｒｅｓｔｉｎ的循环利用；ｃｋ相γ能够与激活的Ｈβ

［］

互作用。ＫａｚｕｔｏｓｈｉＹｏｓｈｉｔａｋｅ等６构建了一对融　它们是一种具有Ｎ端二聚化合的锌指结构蛋白，序列和Ｃ端ＧＦＰ突变体的荧光传感蛋白。他们分别在锌指结构的末端标记ＧＦＰ的突变体ＣＦＰ和

将这一对锌指结构蛋白混合，并且加入特异ＹＦＰ，

济宁医学院学报２０１２年２月第３５卷第１期６１

显的改变，这表明了特异性的双链ＤＮＡ发生了二聚化作用。

性的双链Ｄ作者观察到了ＦＮＡ，ＲＥＴ现象。随后没有观察到Ｆ加入非特异性的双链ＤＮＡ，ＲＥＴ明

图１　ＦＲＥＴ的基本原理

供体）和Ｙ受体）的吸收和发射光谱。ＣＣＦＰ（ＦＰ（ＦＰ发射光谱区域与ＹＦＰ吸收光谱区域重叠处引起有效的ＦＲＥＴ信号；　　　Ａ．

．ＦＲＥＴ的原理示意图。　　　Ｂ

２　ＦＲＥＴ技术与其他一些技术的结合及应用２．１　连续共振能量转移

ＦＲＥＴ涉及不同发射光谱的两个荧光蛋白的能量转移，而ＢＲＥＴ是非辐射的生物发光能量转移到一个荧光蛋白上。ＦＲＥＴ、ＢＲＥＴ已经广泛用于检测活细胞中结构蛋白和动态蛋白的相互作用，这两种技术的自由组合，即ＦＲＥＴ－ＢＲＥＴ、

统称ＢＲＥＴ－ＢＲＥＴ、ＦＲＥＴ－ＦＲＥＴ以及３ＦＲＥＴ（－等所ｓｅｕｅｎｔｉａｌｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒｔｒａｎｓｆｅｒ，ＳＲＥＴ）　　ｑｇｙ　

发挥的作用是最近出现的几种技术单独应用所无法企及的，这些测定法可以测定相互作用的蛋白在亚细胞定位中的作用、实时观测影响多个蛋白复合

［７］

这些方法可以被用来研究活细胞体的动态事件等，

中一系列蛋白质复合体的组装和功能。

２．１．１　高阶寡聚体　利用这两类技术的特性将这两种能量转移技术结合起来可以实时检测活细胞。目前，中多个蛋白质之间的相互作用（图２）已经用ＳＲＥＴ技术实时检测到Ａ２ＡＲ－Ｄ２Ｒ－ＣＢ１Ｒ寡聚

［］８］

和α体［１ｂ肾上腺素寡聚体９。这些寡聚体的研

他们拥有独特的结构和信号通路究是非常重要的，

从而改变了原受体蛋白的功能，例如如果对α１ｂ肾上腺素寡聚体进行突变可以发现细胞的迁移和功能有重大变化，另外，这些寡聚体的独特性为新型药物开发也开启了新的天地。

图２　３ＲＥＴ技术结合的作用原理－Ｆ

２．１．２　信号转导　Ｇ蛋白偶联受体（Ｇｒｏｔｅｉｎ　－ｐ

，）的信号转导日益复杂ｃｏｕｌｅｄｒｅｃｅｔｏｒｓＧＰＣＲｓ　ｐｐ化，这些事件的基础是Ｇ例ＰＣＲｓ和相关靶分子（

）如Ｇ蛋白偶联受体激酶和β之间存在着ａｒｒｅｓｔｉｎ－蛋白质相互作用。应用ＢＲＥＴ与ＦＲＥＴ联合应用的方法能够检测这些蛋白质之间的相互作用从而有助于揭示Ｇ内化，运输，合成和再ＰＣＲｓ的脱敏，循环等整个信号转导过程。例如ＢＲＥＴ－４００ＦＰ－ＧＦＲＥＴＲＥＴＲＥＴＢＲＥＴＧＦＰＦＰ和Ｂ４８０ＦＰ－ＦＧＦＰＦＰ，４００ＦＰ－Ｙ－Ｙ－Ｙ－Ｇ

涉及腔肠素的氧化和能量转移到ｕｖＧＦＰ（ＵＶｅｘ－－，ｃｉｔｅｄＦＰ）ＢＲＥＴｒｅｅｎ　　ｇ４８０ＦＰ涉及腔肠素的氧化和－Ｙ能量转移到ｅ而ｕＹＦＰ，ｖＧＦＰ和ｅＹＦＰ又是ＦＲＥＴ中的完美搭档，由此可见细胞中３个不同蛋白之间可能存在的相互作用也可以被实时动态检测，因此，如果将３者结合起来，即ＢＲＥＴ－４８０ＦＰ－Ｙ

ＢＲＥＴＦＲＥＴＧＦＰ－ＹＦＰ则可以检测同一个活细胞４００ＦＰ－－Ｇ

［０］

人用中多个蛋白之间的相互作用。Ｂｒｅｔｏｎ等１

ＢＲＥＴＢＲＥＴＦＲＥＴＧＦＰ－ＹＦＰ证实出刺激４８０ＦＰ－４００ＦＰ－－Ｙ－Ｇ

６２

而该受体仍Ｒ会使ＧＲＫ２聚集于该受体上，α２ＡＡ

然能与Ｇ／ｉαγα１１２偶联。激酶能同时与Ｇ１１、ｑβ

并能与受体相互作用，这一现象还可Ｇγ１２偶联，β

能量以用于解释ＧＲＫ２的非磷酸化作用。因此，转移结合技术能够揭示出ＧＰＣＲ信号转导中不可预期的动力学过程并且该技术适用于多个生物系这有助于揭示相关疾病发生的分子机理，探寻统，

相关疾病治疗的新突破点及开发新药。２．２　ＰＣＡｓＦＲＥＴ－、这种结合技术主要ＰＣＡｓＦＲＥＴ两类技术的自由组合，如ＢＩＦＣＦＲＥＴ－ＢＩＦＣ、ＢＩＦＣＦＲＥＴ－－［１１］

，ＪＪｉｎｉｎＭｅｄＵｎｉｖＦｅｂｒｕａｒ２０１２，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．１　　ｇｙ　　

２．２．２　信号转导网络蛋白复合体　许多蛋白质能这些相互作用整合起够与不同的靶分子相互作用，

来形成了一个复杂的联系网络，这个网络中相互作用的蛋白的信号能够通过这个网络传递下去。ＦＲＥＴ－ＰＣＡｓ的联合应用能够可视化这个体系中每个蛋白质之间的相互作用，从而有利于了解特定的蛋白质间的相互作用与调节其定位和信号效率之间的关系。这种联合技术已经被实时检测了多包括胞质中可扩散的成分种蛋白质之间相互作用，

以及膜受体，通过对细胞质和细胞核转导成分之间相互作用的研究来追踪不同细胞器间进行的信号转导。用ＢｉＦＣＢＲＥＴ已检测到β２ＡＲ、Ｇ蛋白的－２亚基以及腺苷酸环化酶能形成一个信号复合γ

１４］

。除此之外，体［还可以采用ＢｉＦＣ与ＦＲＥＴ或ＢＲＥＴ联合技术来研究其他ＧＰＣＲｓ的信号转导信号蛋白的空间定位和体系网络的时空动态、

。资料显示，的机制（图４）ＧＰＣＲｓ不仅能以单体的形式存在，还可以以二聚体甚至是高阶寡聚体的形式存在，这些寡聚体有不同于单体的特异功能特征，包括配体识别、脱敏、内化、再循环、合成及运输

１５］，本实验室将用该结合技术来研究Ａ等［ＰＪＯＲ－Κ

等，主要的原理是把荧光蛋白和发光蛋白的Ｎ端

并且让这些受体表达或Ｃ端融合到目标受体上，

在同一个细胞上，如果这些受体能相互作用，这会产生能量转移，即发生ＲＥＴ。ＢＩＦＣＦＲＥＴ－ＢＩＦＣ－运用ＢＩＦＣ中荧光蛋白的重新组合可以分别作为）。图３ＦＲＥＴ中的受体和供体（

２．２．１　高阶寡聚体和蛋白质复合体的亚细胞定位ＲＥＴ－ＰＣＡｓ的结合应用能够同时识别多个　Ｆ

有资料显示，ＧＰＣＲｓ形成的寡聚体，ＦＲＥＴ－ＢｉＦＣ实验表明出ＡＰ１ＦｋａａＢ蛋白复合体的存－－Ｎ－ｐｐ

１２］

，在［腺苷ＢＲＥＴ－ＢｉＦＣ也证实出多巴胺Ｄ２受体、Ａ２Ａ受体以及亲代谢型谷氨酸受体能形成三聚体。众所周知，蛋白质在内质网上进行生物合成，经高尔基体修饰并运输至质膜上表达，因为ＦＲＥＴ可所以Ｆ以成像，ＲＥＴ－ＢｉＦＣ在实时观测复合体形成如的同时还可以对蛋白质复合体进行亚细胞定位（

［１３］

，细胞膜、内质网、高尔基体等）从而有助于我们

异源二聚体与细胞内Ｇ蛋白、ＧＲＫｓ和βａｒｒｅｓｔｉｎ－１６］

，之间的相互作用［这些相互作用有助于探寻相关疾病治疗的新突破点及新药开发。

研究蛋白质，甚至是高阶寡聚体的生物合成过程。

图４　Ｇ蛋白偶联受体的脱敏、内化和再循环的过程

）激动剂与受体结合；２）ＧＲＫｓ介导ＧＰＣＲ发生磷　　１

图３　ＢＩＦＣＲＥＴＩＦＣ技术结合的作用原理－Ｆ－Ｂ

这４个　　两个荧光蛋白被分成２个非荧光片段片段，

片段分别依次标记与４个不同的蛋白质上，如果第１个蛋白与第２个蛋白有相互作用，那么２个非荧光片段结合形成１个发光复合体，即发生Ｂ如果第３个蛋白与ｉＦＣ；第４个蛋白有相互作用，那么两个非荧光片段结合形成１个荧光复合体，即发生Ｂ如果这４个蛋白之间存在相ｉＦＣ；互作用，当加入催化底物后，酶反应提供的能量会转移给荧光蛋白使其发出荧光，即发生ＦＲＥＴ

酸化，受体与Ｇ蛋白－抑制蛋白与磷酸化的受体结合，β）异聚体解耦联，即发生了脱敏反应；通过网格蛋白有被３（）。小窝而发生受体内化和内吞；受体重返胞膜（复敏）４

３　展望

基于荧光和发光新型技术的相互结合已被成功的应用于活细胞ＧＰＣＲｓ高阶寡聚体以及信号

济宁医学院学报２０１２年２月第３５卷第１期６３

［］７ｒｅｔｏｎＢ，ＬａａｃéＭ，ＢｏｕｖｉｅｒＭ．Ｃｏｍｂｉｎｉｎｒｅｓｏｎａｎｃｅｅｎｅｒ　Ｂ　　　ｇｇｇｙ　

ｔｒａｎｓｆｅｒｍｅｔｈｏｄｓｒｅｖｅａｌｓａｃｏｍｌｅｘｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅａｌｈａ２Ａａｄ　　　　　　　－－ｐｐ，ｒｅｎｅｒｉｃｒｅｃｅｔｏｒＧａｌｈａｉ１ｂｅｔａ１ａｍｍａ２，ａｎｄＧＲＫ２［Ｊ］．　　ｇｐｐｇ，（）：ＦＡＳＥＢＪ２０１０，２４１２４７３３４７４３．　－［］，，，８ＣａｒｒｉｂａＧ　ＮａｖａｒｒｏＦＣｉｒｕｅｌａｅｔａｌ．ＤｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆＨｅｔｅｒｏ　Ｐ　　　　　－ｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆＭｏｒｅＴｈａｎＴｗｏＰｒｏｔｅｉｎｓｂＳｅｕｅｎｔｉａｌＢｒｅｔ　　　　　　　－ｙｑ　［］，）：ＦｒｅｔＪ．ＮａｔＭｅｔｈｏｄｓ２００８，５（８７２７７３３．　－［］９ｏｅｚｉｍｅｎｅｚＪＦ，ＣａｎａｌｓＭ，ＰｅｄｉａｎｉＪＤ，ｅｔａｌ．Ｔｈｅａｌｈａ１ｂ　Ｌ－Ｇ　　　　　－ｐｐ

：ａｄｒｅｎｏｃｅｔｏｒｅｘｉｓｔｓａｓａｈｉｈｅｒｏｒｄｅｒｏｌｉｏｍｅｒｅｆｆｅｃｔｉｖｅｏｌｉ　　　　－　　－ｐｇｇ，ｏｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｉｓｒｅｕｉｒｅｄｆｏｒｒｅｃｅｔｏｒｍａｔｕｒａｔｉｏｎｓｕｒｆａｃｅｄｅ　　　　　　－ｇｑｐ，］，：ｌｉｖｅｒａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ［Ｊ．ＭｏｌＰｈａｒｍａｃｏｌ２００７，７１（４）１０１５　　－ｙ１０２９．

［］Ｂ，，１０ＢｒｅｔｏｎＭ　ＬａａｃｅＭ　Ｂｏｕｖｉｅｒ．ＣｏｍｂｉｎｉｎＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒ　　－ｇｇ　

ＴｒａｎｓｆｅｒＭｅｔｈｏｄｓＲｅｖｅａｌｓａＣｏｍｌｅｘｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅＡｌ　　　　　　　－ｇｙｐ　，ｈａ２ａｄｒｅｎｅｒｉｃＲｅｃｅｔｏｒＧａｌｈａｉ１ｂｅｔａ１ａｍｍａ２，ａｎｄＧｒｋ２－Ａ　　ｐｇｐｐｇ［］，（）：Ｊ．ＦＡＳＥＢＪ２０１０，２４１２４７３３４７４３．　－［］Ｓ，１１ｈｕＹＪＳｕａｒｅｚＣＤ，ＨｕＣＤ．Ｖｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｅｒｎａｒｃｏｍｌｅ　　　　　－ｙｙｐ　

［］ｘｅｓｉｎｌｉｖｉｎｃｅｌｌｓｂｕｓｉｎａＢｉＦＣｂａｓｅｄＦＲＥＴａｓｓａＪ．Ｎａｔ　　　　－　　ｇｙｇｙ　　　，（）：Ｐｒｏｔｏｃ２００８，３１１１６９３１７０２．－［］Ｙ，１２ＪＳｈｕ，ＣＤＳｕａｒｅｚＣＤ　Ｈｕ．ＶｉｓｕａｌｉｚａｔｉｏｎｏｆＡ１Ｎｆａ　　　　－－Ｋ－ｙｐｐ

ａｂＴｅｒｎａｒＣｏｍｌｅｘｅｓｉｎＬｉｖｉｎＣｅｌｌｓｂＵｓｉｎａＢｉｆｃａｓｅｄ　　　　　－Ｂｐｙｐｇｙｇ　　　　［］）：ＦｒｅｔＪ．ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ，２００８，１０５（１１５１１５６．　　　　　　－［］ＲＶ　，，，１３ＲｅｂｏｉｓＭ　ＲｏｂｉｔａｉｌｌｅＤＰｅｔｒｉｎｅｔａｌ．ＣｏｍｂｉｎｉｎＰｒｏｔｅｉｎ　　ｇ　

ＣｏｍｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎＡｓｓａｓｗｉｔｈＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒＴｒａｎｓｆｅｒｔｏ　　　　　ｐｙｇｙ　］ＭｕｌｔｉａｒｔｎｅｒＰｒｏｔｅｉｎＣｏｍｌｅｘｅｓｉｎＬｉｖｉｎＣｅｌｌｓ［Ｊ．Ｄｅｔｅｃｔ　　　　　ｐｐｇ　，）：Ｍｅｔｈｏｄｓ２００８，４５（３２１４２１８．－［，１４］ＣａｉＸ，ＣｈｅｎＪＢａｉＢ．ＥｘｌｏｒｉｎｔｈｅｓｅｃｉｆｉｃｒｏｌｅｏｆＧＰＣＲｓ　　　　　　　ｐｇｐ　

［］，ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｉｎｄｒｕｄｉｓｃｏｖｅｒＪ．ＪＣｈｉｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉ　　　　　ｇｙ　２０１１，５３５５４１．－［］蔡欣，陈京，张敬美，等．１５Ｇ蛋白偶联受体激酶在细胞迁移和

］细胞信号转导中的作用［中国病理生理杂志，Ｊ．２０１１，２７：１４３８１４４４．－［］Ｌ，，，１６ＡｌｂｉｚｕＭ　ＣｏｔｔｅｔＭ　Ｋｒａｌｉｋｏｖａｅｔａｌ．ＴｉｍｅｅｓｏｌｖｅｄＦｒｅｔ　　－Ｒ　

ｂｅｔｗｅｅｎＧｃｒＬｉａｎｄｓＲｅｖｅａｌｓＯｌｉｏｍｅｒｓｉｎＮａｔｉｖｅＴｉｓｓｕｅｓ　　　　　　　ｐｇｇ［］，（）：Ｊ．ＮａｔＣｈｅｍＢｉｏｌ２０１０，６８５８７５９４．　　－［］Ｌ，，１７Ａ　Ｈｕ，ＴＺｈｏｕＢＤ　Ｈａｍｍａｎｅｔａｌ．Ａ　ＨｏｍｏｅｎｅｏｕｓＧＰｒｏ　　　　－ｇ

ｔｅｉｎｏｕｌｅｄＲｅｃｅｔｏｒＬｉａｎｄＢｉｎｄｉｎＡｓｓａＢａｓｅｄｏｎＴｉｍｅ－Ｃ　　　　　－ｐｐｇｇｙ　　［］ＲｅｓｏｌｖｅｄＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅＲｅｓｏｎａｎｃｅＥｎｅｒＴｒａｎｓｆｅｒＪ．Ａｓｓａ　　　ｇｙｙ　，）：ＤｒｕＤｅｖＴｅｃｈｎｏｌ２００８，６（４５４３５５０．　－ｇ　

［］ＭＡ　，，，１８ＡｏｕｂＥＴｒｉｎｕｅｔＫＤＰｆｌｅｅｒｅｔａｌ．ＤｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌＡｓｓｏ　　　　－ｙｑｇ

ｃｉａｔｉｏｎＭｏｄｅｓｏｆｔｈｅＴｈｒｏｍｂｉｎＲｅｃｅｔｏｒＰａｒ１ｗｉｔｈＧａｌｈａｉ１，　　　　　　　ｐｐ］，：Ｇａｌｈａ１２，ａｎｄＢｅｔａｒｒｅｓｔｉｎ１［Ｊ．ＦＡＳＥＢＪ２０１０，２４（９）　－Ａ　　ｐ３５２２３５３５．－转导网络中蛋白复合体的研究。虽然这些技术仍，不能在原生环境中直接进行检测）但这存在缺陷（

些技术在不断得到改善和拓展。例如为了证实已经开发出ＧＰＣＲｓ寡聚体在原生环境中的存在，该方法的核心是被荧光一种新型ＴＲ－ＦＲＥＴ方法，配体标记的受体。该方法已被成功运用到原生组织中并成功地展示出乳腺中催产素受体寡聚体的

１７］

。Ｌ存在［Ａ　Ｈｕ等人在此基础上以人类Ｃ５ａ受

体为模型开发出一种研究ＧＰＣＲ－配体之间连接的新型Ｔ以ＴＲＦＲＥＴ方法，ＲＦＲＥＴ为基础的方法－－是一种非放射性、更快速并且具有较高的灵敏性，这种测定法能够被简单地应用于高通量的药物筛

１８］

。经过改善以后的技术的结合可用于更深层选［

次的研究，如将Ｂ发现ＲＥＴ－ＴＲＦＲＥＴ结合起来，蛋白酶激活受体１能与Ｇｉ１、ａｒｒｅｓｔｉｎ１而非α－　β

［９］

。因此，随着技术的拓Ｇｉ１形成预组装复合物１α

展和开发，他们将是很多研究领域中强有力的生物例如用于药物发现，这为、癌症、糖尿病、心血技术，

管疾病的治疗带来新的曙光。参考文献：

［］ｒｏｔｅｉｎ１ｈａｎＳＨ，ＡｈｍａｄＦ，ＡｈｍａｄＮ，ｅｔａｌ．Ｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｅｒａｃ　Ｋ　　　　－　－ｐ

：，，ｔｉｏｎｓｒｉｎｃｉｌｅｓｔｅｃｈｎｉｕｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｏｔｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｉｎｎｅｗ　　　　　ｐｐｐｑ：ｄｒｕｄｅｖｅｌｏｍｅｎｔ．ＪＢｉｏｍｏｌＳｔｒｕｃｔＤｎ，２０１１，２８（６）９２９　　　－ｇｐｙ　９３８．

［］白波，陈京．生物发光共振能量转移技术及其应用２　李雅林，

［］（）：中国生物化学与分子生物学报，Ｊ．２００９，２１２１０７７１０８２．－［］陈京，白波．３Ｇ蛋白偶联受体高阶聚化和信号转导中蛋　蔡欣，

］中国药理学通报，白复合体的时空动态检测［Ｊ．２０１２，２８（１）：８１２．－［］，４ａｖｉｄＷＰ，ＧｅｒｔＪａｎＫ．ＦｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｒｏｔｅｉｎＦＲＥＴ：ｔｈｅｏｏｄ　Ｄ　－　　　　ｐｇ

］，：ｔｈｅｂａｄａｎｄｔｈｅｕｌＪ．ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈｅｍＳｃｉ２００７，３２（９）　　　　　　ｇｙ［４０７４１４．－［］，，，５Ｙ　ＫｈａｎＮＪＭｃＬａｕｈｌｉｎＭＲ　Ｋｅｌｈｅｒｅｔａｌ．Ｌｓｏｈｏｓｈａｔｉ　Ｓ　　－ｇｙｐｐ

）／／）ｄｌｃｈｏｌｉｎｅｓＡｃｔｉｖａｔｅＧ２ａＩｎｄｕｃｉｎＧ（ＡｌｈａｉＧ（Ａｌｈａ　　－－ｙｇｐｐｑ　（）（）Ｃａ２＋）Ｆｌｕｘ，Ｇ（ＢｅｔａａｍｍａｃｋＡｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄＣｌａｔｈ－Ｈ　　　－ｇ／／［］ｒｉｎＢｅｔａｒｒｅｓｔｉｎ１Ｇｒｋ６Ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ．ｉｎＰｍｎｓＪ．Ｂｉｏｃｈｅｍ－Ａ－　，（）：Ｊ２０１０，４３２１３５４５．－［］，Ｈ　６ｏｓｈｉｔａｋｅＫ，Ｓ　ＷａｋｉＵｅｄａ．Ｄｉｍｅｒｉｚａｔｉｏｎｂａｓｅｄｈｏｍｏｅ　Ｙ　－　－ｇ

ｎｅｏｕｓｆｌｕｏｒｏｓｅｎｓｏｒｒｏｔｅｉｎｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｃｉｆｉｃｄｓＤ－　　　　　　　　ｐｐ］），（：３ＮＡ［Ｊ．ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＳｍＳｅｒ（Ｏｘｆ２００７，５１）０７　　－ｙｐ　３０８．

（）收稿日期　２０１２０１０５－－