・ ３２ ・ 中国药物与临床２０１２年１月第ｌ２卷第１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．１ 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表型分型 与耐药基因检测分析研究 郭云龙赵先进韩宏艳孙静张丽珍戎建荣 【摘要ｌ 目的分析研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ，ＭＲＳＡ１ 的耐药表型及耐药基因，探索治疗ＭＲＳＡ感染的有效手段。方法对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株， 依据美国Ｉｆ缶床实验室标准化研究所（ＣＬＳＩ）标准操作规程进行万古霉素、利奈唑胺和苯唑西林等药物的药物敏感 性试验和耐药基因检测。分别采用微量肉汤稀释法和多重聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增法。结果ＭＲＳＡ耐药表型分 为Ｉ一Ⅶ型，ＭＲＳＡ对抗生素产生多重耐药，万古霉素、利奈唑胺、氯霉素、复方新诺明、利福平耐药率分别为０、 ７．０％、４０．８％、４７．９％、６０． ，Ｂ．内酰胺类药物耐药率高达１００％；实验菌株ｍｅｃＡ、ｅｒｍＡ、ｅｒｍＣ、ｔｅｔＫ、ｔｅｔＭ、ｒａｔＡ基因 检出率分别为９８．６％、６０．６％、ｌ８．３％、１００％、７．Ｏ％和０。结论ＭＲＳＡ对万古霉素、利奈唑胺敏感，其他药物呈多重 耐药，需加强ＭＲＳＡ对万古霉素、利奈唑胺、氯霉素、复方磺胺、利福平等常用药物最小抑菌浓度（ＭＩＣ）监测和临 床报告，关注万古霉素对ＭＲＳＡ治疗不佳患者。 【关键词】葡萄球菌，金黄色；微生物敏感性试验；表型；抗药性 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ・ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｌｌｒｅｕｓ ＧＵＯ Ｙｕｎ— ｌｏｎｇ＊，ｚＨＡ０ Ｘｉａｎ－ｊｉｎ，ＨＡＮ Ｈｏｎｇ－ｙａｎ，ｓＵＮ Ｊｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｌｉ－ｚｈｅｎ，ＲｏＮＧ Ｊｉａｎ－ｒｏｎｇ．＂Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｃｈａｎ￣ｚｈ Ｐｅｏｐｌｅ ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｈ彻 ０４６０００．Ｃｈｉｎａ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｄｅｎｔｉ￣ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔｎｔａ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｆＭＲＳＡ）．ａｎｄ ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ＭＲＳＡ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｖａｎ． ｃｏｍｙｃｉｎ，ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ ａｎｄ ｏｘａｃｉｌｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｅｓｔｓ ａｎｄ ｇｅｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ ｉｓｏｌａｔｅｄ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｕｓｉｎｇ ｔｒａｃｅ ｂｒｏｔｈ ｄｉｌｕｔｉｎｇ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ａｎｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｔｈａｔ ｗｅｒｅ ｉｎ ｌｉｎｅ ｗｉｔｈ ｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｄ ｏｐｅｒａｔｉｎｇ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆＣＬＳＩ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ Ｉ～Ⅶ．ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ，ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ，ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ，ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｔｒｉｍｅｔｈｏｐｒｉｍ．ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ，ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ ａｎｄ Ｂ．１ａｃｔａｍｓ ＷａＳ ０， ７．Ｏ％，４０．８％，４７．９％，６０．６％ａｎｄ １００％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄｅｔｅｃｔａｂｌｅ ｒａｔｅ ｏｆ ｓｔｒａｉｎｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｇｅｎｅｓ ｏｆ ｍｅｃＡ， ｍｅｃＡ、ｅｒｍＡ、ｅｒｍＣ、ｔｅｔＫ、ｔｅｔＭ、ｒａｔＡ ｗａｓ ９８．６％、６０．６％、１８．３％、１００％、７．０％ａｎｄ ０，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＭＲＳＡ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｔｏ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ ａｎｄ ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ ｂｕｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｒｅｐｏｒｔｓ ｃｏｎｃｅｒｎｉｎｇ ｉｎ． ｔｅｎｓｉｖｅ ｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇ ｏｎ ｍｉｎｔｍａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ，ｌｉｎｅｚｏｌｉｄ，ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃｏｌ， ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｔｒｌｍｅｔｈｏｐｒｉｍ．ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ ａｎｄ ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ ｎｅｅｄｓ ｔｏ ｂｅ ｄｉｒｅｃｔｅｄ． Ａｔｔｅｎｔｉｏｎ ｓｈｏｕｌｄ ａｌｓｏ ｂｅ ａｔｔａｃｈｅｄ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｗｉｔｈ ｐｏｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ； Ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ；Ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）是医院和 社区感染的重要病原菌。自１９６１年英国医师Ｊｅｒｏｎｓ 首次临床报告第一例ＭＲＳＡ感染患者以来，检出率 逐年上升，分离率约占葡萄球菌４０％一７０％［ ，已引 耐药表型特征及其与耐药基因的关系，我们对山西 治市人民医院临床分离的７１株ＭＲＳＡ进行耐 药表型分型和耐药基因检测。 １材料和方法 起全世界重视。ＭＲＳＡ不仅对Ｂ．内酰胺类抗生素耐 药，还常对喹诺酮类、氨基糖苷类和大环内酯类等抗 菌药物耐药。由于呈多重耐药性，易造成医院感染 的暴发流行，全身感染的病死率高达５０％以上，已 成为临床抗感染治疗的一大难题［ 。为研究ＭＲＳＡ 基金项目：山西省回国留学人员科研资助项目（２０１０—９４） １．１菌株来源：收集２００８年１月至２０１０年１月由 山西治市人民医院临床分离的ＭＲＳＡ ７１株，同 一病例仅采用第一分离株。菌株来源于住院和门诊 患者各类临床标本，包括血液、痰液、脓液、伤口分泌 物、脑脊液、引流液等。 １．２仪器与试剂：Ｍｉｃｒｏｓｃａｎ一４自动微生物鉴定仪 作者单位：０４６０００山西治市人民医院检验科（郭云龙、赵 先进、韩宏艳、孙静、张丽珍）；山西省临床检验中心科教处（戎建荣） （美国德灵公司产品），博日定性基因扩增仪，伯乐凝 胶成像仪，细菌鉴定及最小抑菌浓度（ＭＩＣ）药物敏 中国药物与临床２０１２年１月第１２卷第１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｊａｎｕａｒｙ Ｑ ！ ． ． 感试验试剂Ｓｉｅｍｅｎｓ ＰＣ２０由美国德灵公司提供，细 增：通过ＰＣＲ对ｍｅｅＡ基因进行扩增，阳性对照为 菌鉴定条ａｐｉＳｔａｐｈ、凝固酶试剂Ｓｌｉｄｅｘ Ｓｔａｐｈ Ｐｌｕｓ由 ＡＴＣＣ４３３００．阴性对照ＡＴＣＣ２９２１３。将ＤＮＡ模板１ 生物梅里埃（ＡＰＩ）公司提供。药物敏感性试验测试 ｌ加入总体积为２０ ｌ的反应体系（含１０ｘＰＣＲ 药物有万古霉素、利奈唑胺、氯霉素、复方磺胺、利福 ｂｕｆｆｅｒ２．０ Ｉｘｌ，２５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ １．２ ｔｘｌ，Ｄｎｔｐ１．０ Ｉｘｌ， 平、四环素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大 ＴａｇＤＮＡ酶Ｏ．２ ｌ，引物１和引物２各１．０ ｌ，无菌 霉素、红霉素、青霉素、苯唑西林、氨苄西林、头孢唑 双蒸水１２．６ Ｉｘ１）。热循环参数为９５℃预变性５ ｍｉｎ， 林、阿莫西林／克拉维酸、亚胺培南／西司他丁。 然后９４℃１ ｍｉｎ。５５℃１ ｍｉｎ，７２℃１ ｍｉｎ，循环３０ １．３ ＭＲＳＡ分离培养鉴定和ＭＩＣ药物敏感性试验： 周期。７２℃延伸１０ ｍｉｎ的条件下进行ＰＣＲ反应。取 临床各类标本均按《全国ＩＩ缶床检验操作规程》［ ］进行 １０ ｌ ＰＣＲ产物点人含溴化乙锭（ＥＢ）的１％琼脂糖 细菌培养、分离纯化，分离后菌株经Ｍｉｅｒｏｓｃａｎ一４ 凝胶．０．５倍稀释的混合酸／氢氧化钠（０．５ｘＴＢＥ）为电 Ｓｉｅｍｅｎｓ ＰＣ２０革兰阳性复合板鉴定，及ａｐｉＳｔａｐｈ鉴 泳缓冲液，用水平式电泳槽稳压ｌ１０ Ｖ，电泳４Ｏ 定条和凝固酶试剂Ｓｌｉｄｅｘ Ｓｔａｐｈ Ｐｌｕｓ进行复核均鉴 ｍｉｎ。凝胶成像系统观察结果成像。 定为ＭＲＳＡ，药敏试验判断标准依美国国家实验室 多重ＰＣＲ检测方法：采用７对不同ＰＣＲ引物 标准化协会（ＣＬＳＩ）苯唑西林ＭＩＣ －ｉ－４ １ｌｌｌ鉴定为 （ｍｅｃＡ，ｅｒｍＡ，ｅｒｍＣ，ｔｅｔＫ，ｔｅｔＭ，ｖａｔＡ，ｖａｔＣ）对实验室 ＭＲＳＡ，试验过程用ＡＴＣＣ２５９２３，ＡＴＣＣ２９２１３， 菌株进行耐药基因扩增，使用引物见表１。①ＤＮＡ ＡＴＣＣ４３３００标准菌株进行质控。测定结果输入 提取：挑取经２次纯化后的新鲜单个菌落ｌ～２个， ＷＨＯＮＥＴ５．４软件统计分析，计算耐药率、中介率、 于１００ Ｉｘｌ双蒸水中混匀作为ＰＣＲ模板；（￣ＰＣＲ扩 敏感率、基因检出率等。质控菌株ＡＴＣＣ２５９２３， 增：通过ＰＣＲ对ｍｅｃＡ基因进行扩增。阳性对照为 ＡＴＣＣ２９２１３．ＡＴＣＣ４３３００购自卫生部临床检验中 ＡＴＣＣ４３３００，阴性对照ＡＴＣＣ２９２１３。将ＤＮＡ模板１ 心。 ’ ｌ加人总体积为４０ ｌ的反应体系（含１０ｘＰＣＲ １．４ ＭＲＳＡ耐药表型分型：依据对不同药物的耐药 ｂｕｆｆｅｒ ４．０ ｌ，２５ ｍｍｏｌ／Ｌ Ｍｇ２ ．４ ｔｘｌ，ＤＮＡ模板２．０ 性将ＭＲＳＡ分为Ｉ～Ⅶ型。 ｌ，ＰＣＲ ｂｕｆｆｅｒ ２．０ ｌ，ＴａｇＤＮＡ酶０．４ ｌ，引物１和 １．５ ＭＲＳＡ菌株耐药基因检测：ｍｅｃＡ基因检测： 引物２各１．０ ｌ（引物共１４ １），无菌双蒸水１５．２ ＤＮＡ提取：挑取经２次纯化后的新鲜单个菌落１—２ １）。热循环参数为９４℃预变性３ ｍｉｎ，然后９４℃ 个，于１００ ｌ双蒸水中混匀作为聚合酶链反应 ３０ Ｓ，５５℃３０ Ｓ。７２ ｏＣ ３０ Ｓ，循环３Ｏ周期，７２℃延伸 （ＰＣＲ）模板。ｍｅｃＡ基因ＰＣＲ引物序列为：５－ＣＴ— ４ ｍｉｎ的条件下进行ＰＣＲ反应。取１５ ＩＸ１ ＰＣＲ产物 ＧＣＴＡＣＡＧＧＴＡＴＣＣＧＴＧＡＡＴＡ－３：５一 ＩＴＧＴＡＴＴＧＡＣＴ－ 点入含ＥＢ的１．５％琼脂糖凝胶，０．５￣ＴＢＥ为电泳缓 ＧＴＡＴｃＴＣ，Ｉ，Ｉ１＇ＧＧＡ．３’产物长为５９５ ｂｐ［２］ｏ ＰＣＲ扩 冲液。用水平式电泳槽稳压７０ Ｖ，电泳８０ ｍｉｎ，凝胶 表１本次实验所用引物序列产物长度及基因库相应序列编号 中国药物与临床２０１２年１月第ｌ２卷第１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｊａｎｕａｒｙ ２０１２，Ｖｄ．１２，Ｎｏ．１ 成像系统观察结果成像。 ２结 果 ２．１ ＭＲＳＡ耐药表型分型：７１株ＭＲＳＡ对青霉素、 苯唑西林、氨苄西林、头孢唑林、阿莫西林，克拉维 酸、亚胺培南眉司他丁耐药率均为１００％，对万古霉 敏感 株数利奈唑胺 氯霉素 复方磺胺 利福平 四环素 克林霉素 环丙沙星 左氧氟沙星 庆大霉素 红霉素 ５ 素敏感率为１００％。７１株ＭＲＳＡ对基他常用药物耐 药结果见表２。ＭＲＳＡ耐药表型分型见表３。依据耐 药表型特征将ＭＲＳＡ临床株分为Ｉ一Ⅶ型。相应耐 药率分别为７．Ｏ％、４０．９％、４７．９％、６０．６％、６７．６％、 ９７．２％和１．４％。 中介 ｍ Ｍ株数 妈● 裹２ ７１株ＭＲＳＡ对常用抗菌药物的敏感中介和耐药率 抗菌药物 耐药 中介率（％） 株数 耐药率（％） ：８ 敏感率（ ”勰 ％）卯 ∞ ７ １ ４ ５ ７ １ ７ ３ 墙● ４ 表３ ＭＲＳＡ耐药表型分型及耐药百分率 ２Ｏ００ １０（）０ ２ １ ７５Ｏ ８ ４ ５０ｏ ２００ １００ ｌ ４ ｌ ４ Ｏ ０ １ ４ ２ ８ ９ ９ ５ ６ Ｍ：分子量标志；一：阴性对照；＋：阳性对照；１—２０号：阳性标本，其ＰＣＲ扩增 产物大小为５３２ ｂｐ 图１ ｍｅｃＡ基因ＰＣＲ电泳图 ｌ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ ｌ４ ｌ５ ｌ６ Ｏ ∞＂２ ６ ９ 钉９ ∞ ６ １ ５ ；ｌ ９ ２ ２．２ ｍｅｃＡ基因ＰＣＲ检测结果：７１株ＭＲＳＡ中， ｍｅｃＡ基因７Ｏ株阳性，检出率９８．６％，部分临床分离 株ｍｅｃＡ基因ＰＣＲ产物电泳结果见图１。 ２．３ 多重ＰＣＲ扩增结果：见图２。多重ＰＣＲ对 ７对ＰＣＲ产物大小分别为：ｍｅｃＡ：５３２ｂｐ，ｔｅｔＫ：３６０ｂｐ，ｖａｔＣ：４６７ｂｐ， 三一 ｅｒｍＣ：２９９ｂｐ，ｖａｔＡ：２６８ｂｐ，ｅｌ＇ｍＡ：１９０ｂｐ，ｔｅｔＭ：１５８ｂｐ。１￣１４为临床分离 的耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ），１５号为阴性对照菌珠，１６号 为ＤＮＡ．Ｍａｒｋ ＭＲＳＡ耐药基因进行检测结果显示，被检测的７１株 图２多重耐药基因扩增电泳图 ＭＲＳＡ实验菌株中７０株ｍｅｃＡ基因阳性，ｔｅｔＫ基因 全部阳性，各对引物扩增阳性结果与实验菌株的比 例为：ｍｅｃＡ（７０／７１），ｔｅｔＫ（７１／７１），ｖａｔＣ（０／７１），ｅｒｍＣ （１３／７１），ｖａｔＡ（０／７１），ｅｒｍＡ（４３／７１），ｔｅｔＭ（５／７１）。各菌 ＭＲＳＡ的有效药物．未发现耐药菌株，但更深入研究 表明在万古霉素敏感菌株中约１０％存在中介状态 的异质菌株 ．这些菌株是导致重症患者迁延不愈 或死亡的重要原因。Ｂ．内酰胺类药物对治疗ＭＲＳＡ 感染症无效。Ｉ型耐药菌仅对利奈唑胺耐药，耐药 率为７．０％，是临床治疗ＭＲＳＡ次选择药物；ＩＩ型耐 株的耐药表型与多重ＰＣＲ扩增产物数量呈正相关。 ３讨 论 ３．１耐药分型：本研究表明万古霉素是临床治疗 药菌仅对氯霉素耐药，耐药率为４０．８％，是治疗 中国药物与临床２０１２年１月第１２卷第１期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｒｅｍｅｄｉｅｓ＆Ｃｌｉｎｉｃｓ，Ｊａｎｕａｒｙ ｏ１２，Ｖｏ１．１２，Ｎｏ．１ ＭＲＳＡ药物中耐药率相对较低的一种，但由于其不 良反应了临床上的使用；Ｉ～Ⅱ型耐药菌仅对 复方新诺明耐药，耐药率为４７．９％，在个性化用药中 将发挥重要作用；ＩＶ型耐药菌仅对利福平耐药，耐药 率为６０．６％．是经验用药的重要选择；Ｖ型耐药菌同 时对四环素、克林霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、庆大 霉素耐药，耐药率为６７．６％，这些药物仅可在做ＭＩＣ 药敏试验后方可配合其他药物使用；ＩＶ型耐药菌仅 对红霉素耐药．耐药率为９７．２％，这种药物已失去治 疗ＭＲＳＡ的候选：ＶＩＩ型耐药菌［５］对庆大霉素、利福 ＰＣＲ技术是在感染病原体的诊断中应用的最成熟 广泛的一项基因诊断技术。实验中采用ＰＣＲ法对金 黄色葡萄球菌的ｍｅｃＡ等基因进行检测，能客观地 反应其耐药性，敏感性高，特异性强，是一种快速诊 断ＭＲＳＡ及测试其耐药基因的方法。可使临床及时 选择治疗有效的药物，迅速控制以多重耐药为特点 的ＭＲＳＡ所造成的感染，其播散。同时，也可以 减少抗生素的滥用，避免真菌或多重感染的机会。 常规检测ＭＲＳＡ的ＭＩＣ加ＰＣＲ测试其耐药基因的 方法是临床治疗和控制ＭＲＳＡ感染的有效手段。 平、复方新诺明敏感，但对青霉素、红霉素耐药，占研 究菌株１．４１％。这型菌可能是青霉素敏感株和多重 耐药株间的过渡菌株。对研究ＭＲＳＡ耐药机制及新 药研发有重要意义。 ３．２耐药表型与基因型关系：ＭＲＳＡ产生多重耐药 性除与产生Ｂ．内酰胺酶有关外，可能还与产生新的 ｐ．内酰胺酶类低亲合力青霉素结合蛋白（ＰＢＰ）２ａ改 变抗菌药物作用靶位、产生修饰酶、膜通透性降低及 主动外流泵等机制有关［６３，机制较为复杂。７１株 ＭＲＳＡ ｍｅｃＡ基因检出率为９８．６％，苯唑西林ＭＩＣ 均ｉ＞４ 咖ｌ，与文献［７］相符合；在ＭＲＳＡ ＭＩＣ试验 时发现抗菌药物ＭＩＣ值有漂移现象．有时会影响 ＭＲＳＡ的诊断．实验菌株有１株表型鉴定为ＭＲＳＡ， 未检出ｍｅｃＡ基因．所认ｍｅｃＡ基因是确认ＭＲＳＡ 的金标准嘲。测试菌株ｖａｔＡ基因全部阴性，未发现 万古霉素耐药菌株，但应关注异质性万古霉素中介 菌株。这些菌株常规方法不能检出；ｔｅｔＫ基因检出率 为１００％，ｅｌＴｌｌ基因检出率为２．８％，四环素耐药率为 ７６．０％，提示四环素耐药是多基因或多机制如泵机 制等作用的结果；ｅｔＭ基因检出率为６０．６％，与红霉 素耐药表型呈正相关．为获得性大环内酯类耐药的 主要方式［， ；Ａｐｈ（３ ）．ＩＩＩ是５个氨基糖苷类修饰酶 基因中的一个，文献［１０］报道检出率为７２．７０％，庆 大霉素耐药率为７８．８％，提示氨基糖苷类耐药机制 还有其他基因或机制。密切监测常用药物ＭＩＣ值可 探索ＭＲＳＡ新的耐药机制。 ３．３ 临床对策：ＭＲＳＡ感染症被列为世界三大最难 解决的感染性疾患的首位Ｉｌ１］。研究显示我院ＭＲＳＡ 多重耐药，仅万古霉素和利奈唑胺有较好活性，本地 区经验用药选择依次为万古霉素、利奈唑胺、氯霉 素、复方新诺明、利福平、四环素等。然而准确检测 ＭＲＳＡ及其药物ＭＩＣ，对于危重患者用药意义重大： 参考文献 ［１］Ｈｕｙｇｅｎｓ Ｆ，Ｎｉｍｍｏ ＧＲ，Ｓｃｈｏｏｎｅｖｅｌｄｔ Ｊ，ｅｔ ａ１． Ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ—ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｂｙ ａｓｓａｙｉｎｇ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｃｅ ｏｆ ｖａｒｉａｂｌｅ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｅｃＡ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００２，４０：３０９３・３０９７． ［２］Ｃｈａｍｂｅｒｓ ＨＦ．Ｔｈｅ ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｃｏｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ？Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００１，７：１７８—１８２． ［３］中华人民共和国卫生部医政司．全国临床检验操作规程．３版． 南京：东南大学出版社。２００６：７５９—７６２． ［４］陈宏斌，王辉，孙闻喜，等．２００７年中国１４个城市异质性万古 霉素中介耐药的金黄色葡萄球菌分子特征．中华检验医学杂 志，２００９，３２（１１）：１２２３－１２２５． ［５］张坚磊，王世瑜，陈锦艳，等．天津地区耐甲氧西林金黄色葡萄 球菌基因分型研究．中华检验医学杂志，２０１１，３４（５）：４４７． ［６］ｈｏ Ｔ，Ｋａｔａｙａｍａ Ｙ，Ａｓａｄａ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｅ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃａｌ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｍｅｃ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ ｉｎ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｏｕｓ． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００１，４５：１３２３ １３３６． ［７］Ｄａｕｍ ＲＳ，Ｉｔｏ Ｔ，Ｈｉｒａｍａｔｓｕ Ｋ，ｅｔ ａ１． Ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ． ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｃａｓｓｅｔｔｅ ｉｎ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ・－ａｃｑｕｉｒｅｄ ｍｅｔｈｉｃｉＵｉｎ－－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ ｄｉｖｅｒｓｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄｓ．Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００２，１８６：１３４４－１３４７． ［８］Ｖｅｌａｓｅｏ Ｄ，ｄｅｌ Ｍａｒ Ｔｏｍａｓ Ｍ，Ｃａｒｔｅｌｌｅ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ｍｅｔｈｉｅｉｌｌｉｎ（ｏｘａｃｉｌｌｉｎ）ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｏｕ．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２００５，５５：３７９・ ３８２． ［９］Ｒｏｈｅａｓ ＭＣ，Ｓｕｔｃｌｉｔｔｅ Ｊ，Ｃｏｕｒｖａｌｉｎ Ｐ，ｅｔ ａ１． Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｆｏｒ ｍａｅｒｏｌｉｄｅ ａｎｄ ｍａｃｒｏｌｉｄｅ・・Ｌｉｎｅｏｓａｍｉｄｅ・－ｓｔｒｅｐｔｏｇｒａｍｉｎ Ｂ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ． Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９９，４３：２８２３— ２８３０． ［１Ｏ］孔海深，徐根云，姜慧芬，等．耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重 耐药基因检测．中华检验医学杂志，２００５，２８（１０）：１０２７—１０２９． ［１１］Ｅｎｒｉｇｈｔ ＭＣ，Ｄａｙ ＮＰ，Ｄａｖｉｅｓ ＣＥ，ｅｔ ａ１． Ｍｕｌｔｉｌｏｃｕｓ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔｙｐｉｎｇ ｆｏｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ａｎｄ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ— ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｃｌｏｎｅｓ ｏｆ ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｌａ， ２０００，３８：１００８一１０１５． （收稿日期：２０１１－１０．２４）
