EMIT法和FPIA法监测全血环孢素A浓度相关性比较

陈璐;边原;涂碎萍;杨勇;龙恩武

【摘 要】目的 比较酶放大免疫法(EMIT)与荧光偏振免疫法(FPIA)监测全血中环孢素A(CsA)浓度的测定结果,并进行相关性分析.方法 收集126例/次临床使用环孢素A的患者稳态浓度血样,分别用EMIT法及FPIA法测定,并考察两种方法测定结果的相关程度.结果 2种不同方法测定CsA血药浓度平均值(x±s)分别为EMIT法:(205.77±117.65)ng/mL;FPIA法:(186.49±112.16)ng/mL,以SPSS 19.0对经对数转换后的两组浓度数据进行配对样本T佥验,其P=0.00,即两种测定方法有显著性差异.将患者分为肾移植组(63例/次),肝移植组(17例/次),干细胞移植组(31例/次),肾病综合征组(15例/次).以SPSS19.0对四组浓度数据分别进行组内的配对样本T检验,得到肾移植组与肝移植组P＜0.05,差异具统计学意义.干细胞移植组与肾病综合征组P＞0.05,差异无统计学意义.结论 对CsA进行治疗药物监测时应考虑不同分析方法的影响.

【期刊名称】《国外医药（抗生素分册）》 【年(卷),期】2017(038)001 【总页数】3页(P41-43)

【关键词】环孢素A;酶放大免疫法;荧光偏振免疫法;治疗药物监测 【作 者】陈璐;边原;涂碎萍;杨勇;龙恩武

【作者单位】四川省科学医学院·四川省人民医院,成都610072;四川省科学医学院·四川省人民医院,成都610072;电子科技大学医学院,成都6100;四川省科学医

学院·四川省人民医院,成都610072;四川省科学医学院·四川省人民医院,成都610072

【正文语种】中 文 【中图分类】R96

环孢素A(Cyclosporin A，CsA)是一种T淋巴细胞功能调节药，通过干扰淋巴细胞活性，阻断参与排斥反应的体液和细胞效应机制，防止排斥反应的发生[1]。CsA现已广泛用于器官和组织移植术后抗排异反应及自身免疫性疾病的治疗，成为目前肾、肝及骨髓等器官和组织同种异体移植时的首选药之一[2]。但CsA口服吸收不完全，生物利用度较低，个体差异大，且其血药浓度易受生理、病理、食物、合并用药等多种因素影响[3]。加之其治疗窗窄，须定期监测其血药浓度，才能避免治疗无效或药物毒性反应的发生[4]。临床常用的CsA血药浓度监测分析方法有高效液相色谱法(HPLC)，液质联用法(LC-MSMS)，均相酶放大免疫法(EMIT)和荧光偏振免疫法(FPIA)。高效液相色谱法(HPLC)与液质联用法(LC-MSMS)由于处理方法复杂，设备成本较高等不利因素，未被广泛使用。而均相酶放大免疫法(EMIT)和荧光偏振免疫法(FPIA)是目前临床全血CsA血药浓度监测应用最广泛的方法，两种方法均检测速度快捷，数据准确，非常适合临床使用。为了研究不同分析方法对CsA血药浓度检测是否存在差异，该差异是否影响临床药物治疗浓度范围的使用，保障器官移植和免疫系统疾病的用药安全，本文对均相酶放大免疫法和荧光偏振免疫分析法进行了对比。 1.1 仪器

荧光偏振免疫分析仪(美国雅培公司)；VIVa-E(西门子公司)；高速离心机HC-2517(安徽中科中佳科学仪器有限公司)；旋涡混合器XH-B(姜堰市康健医疗器具有限公司)。

1.2 试药

CsA软胶囊(华北制药股份有限公司，规格：每粒25mg，批号：111102)；CsA试剂盒(批号06099jn00等)；CsA质控(批号批号04239JN00)；CsA定标液(批号07071JN00)(美国雅培公司)；CsA试剂盒(批号6R079UL-D3)；CsA质控(批号02791，02792，02793等)；CsA定标液(批号 6r119UL-D1)(西门子公司)。 2.1 基本资料

本研究收集了126(例/次)干细胞移植、肝移植、肾移植、膜性肾病等不同病种及不同年龄阶段的患者同日同一血样，患者均接受CsA治疗达固定剂量后至少5d，血液样本均同时采用EMIT及FPIA法两种方法测定CsA血药浓度结果。 2.2 采血方法

所有患者谷浓度均于早晨用药前取外周静脉血3.0mL，置于干燥的EDTA抗凝管中，摇匀置4℃冰箱中保存，待测CsA谷浓度。 2.3 检测方法 2.3.1 FPIA法

精密吸取150μL全血于离心管中，加入300μL沉淀剂，再加入50μL溶血剂(细胞破碎剂)，振摇，旋涡60s混匀后高速(14000r/min)离心4min。取上清液入转盘上的样品杯中，用AXSYM药物浓度分析仪(FPIA法)快速测定CsA全血谷浓度。 2.3.2 EMIT法

精密吸取100μL全血于离心管中，加入300μL前处理液，振摇，涡旋60s后高速离心(14000r/min)离心6min。取上清液入转盘上的样品杯中，用VIVA-E药物浓度分析仪(EMIT法)快速测定CsA全血谷浓度。 3.1 患者基本资料

本文共检测63例肾移植、肝移植、干细胞移植和膜性肾病患者，126例/次，其中男性82例/次，女性44例/次，平均年龄38.9岁，平均体重56.9kg。两种不

同方法测定CsA血药浓度平均值(x±s)分别为EMIT法：205.77±117.65ng/mL；FPIA法：186.49±112.16ng/mL。 3.2 统计学方法

经Shapiro-Wilk(W)检验，2种分析方法原始浓度数据均为非正态分布。将两组监测浓度数据做对数转换处理后，经W检验，其P值分别为：P(EMIT)=0.24；P(FPIA)=0.66，均＞0.05，故可确定经对数转换后两组数据呈正态分布。以SPSS19.0对经对数转换后的两组浓度数据进行配对样本T检验，其P=0.00，即两种测定方法有显著性差异。 3.3 统计分析结果

经SPSS配对样本T检验，EMIT和FPIA进行对比分析见表1，(1)对于肾移植、肝移植测定时，P值均＜0.05，差异具有统计学意义。(2)而对于干细胞移植、肾病综合征测定时，P值均＞0.05，无统计学差异，如表1。

FPIA法与EMIT法两种免疫分析法由于前处理过程简单，分析速度快，应用范围较广，已成为目前临床治疗药物监测中使用最广泛的两种方法。但应用免疫法监测CsA血药浓度，不能忽略其监测方法中CsA代谢产物的交叉反应对其监测结果产生的干扰，干扰所致结果变化会直接影响临床用药的安全性与有效性。

FPIA法是荧光偏振免疫法，依据荧光标记抗原和其抗原抗体结合物之间荧光偏振程度的差异，用竞争性方法直接测量溶液中小分子的含量[5]。该法利用抗原抗体相互识别结合产生检测信号，当某些抗原具有与待测物相同的抗原表面标志或抗体有多个抗原结合位点时，可导致抗体与抗原结构相近的母体代谢产物、内源性物质产生交叉反应，使测定结果高于真实值。EMIT是酶均相放大免疫分析技术，其原理是基于样本中的药物与用葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标记的药物竞争抗体结合位点，与抗体结合后，酶活性降低，根据其活性降低速率来确定样本中目标物的浓度。两种方法原理的不同，造成监测结果可能存在差异[6]。

本文比较两种方法监测CsA血药浓度，分析结果发现，在不同疾病类型，不同合并用药的前提下，器官移植术后(包含肾脏移植与肝脏移植)CsA血药浓度监测在两种分析方法结果存在差异。而干细胞移植术后与肾病综合征治疗中CsA血药浓度监测，两种分析方法没有差异。这可能与分析方法原理不同相关，由于不同疾病类型，合并用药不同，产生的母体代谢产物的量、内源性物质的种类与量均可能存在差异，对免疫分析方法的干扰程度不同，因而产生差异。当然干细胞移植与肾病综合症患者病例数较少，也可能是造成其差异未能体现的原因。

本文比较的结果提示在临床治疗中，在不同分析方法存在监测结果差异的前提下，不能使用固定药物治疗窗范围，应在考虑CsA血药浓度范围是否为治疗浓度的同时，结合患者肝肾功能及其它临床表现，制定患者个体化给药方案，以提高CsA血药浓度监测对临床治疗的指导意义。

【相关文献】

[1] 陈新谦, 金有豫, 汤光. 新编药物学[M]. 第17版. 北京人民卫生出版社, 2011, 17(44)691. [2] 张静, 王羽, 王璐璐, 等. 测定环孢素浓度的两种方法对比及临床应用[J]. 中国新药与临床杂志, 2011. 30(5): 374-376.

[3] 陈莲珍, 王玉琴. 影响环孢素A血药浓度的因素和干预对策[J]. 中国药学杂志, 2001, 36(4): 277. [4] 王彬, 娄子洋, 柴逸峰, 等. HPLC-MS法和mFPIA法测定全血环孢霉素A及其代谢物的比较[J]. 药物分析杂志, 2007, 27(9): 1378-1381.

[5] 朱广华, 郑洪, 鞠先. 荧光偏振免疫分析技术的研究进展[J]. 分析化学, 2004, 32(1): 102-106. [6] 刘思婷, 张永, 仇锦春, 等. EMIT和FPIA测定丙戊酸、甲氨喋呤和环孢霉素A血药浓度的比较研究[J]. 中国现代应用药学, 2012, 29(8): 740-744.