糖苷酶的检测方法及临床应用

＿　ｓ　国外医学临床生枷化学与趋堕堂　！　生蔓　堂蔓　塑　７９　糖苷酶的检测方法及临床应用　上海医科大学华山医院检验科（２０Ｏ０４０）韩榜成　综述　争；　吕　元审校　摘要：细胞膜和体液中的蛋白质大多数为糖蛋白，痛理情况下，由于糖苷酶的参　与．才会有糖蛋白的数量和糖链结构的变化。大量的资料表明，糖苷酶已成为肝癌、肝　硬化．以及肾功能损坏等疾痛的标志。本文　对与临康密切相关的糖苷酶的检测方法和　临康应用进抒了综述。　关键词：糖苷酶；肝癌｝肝硬化；慢性肾　斤脖　斤脖扔　缎　和　硬夏　一　糖苷酶（Ｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ）是一大类璀化糖苷　键水解的水解酶，糖苷酶有几十种，根据作用　方式和产物可分为内切糖苷酶（Ｅｎｄｏｇｌｙ·　ｃｏｓｉｄａｓｅ）和外切糖苷酶（Ｅｘｏｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ）。　糖苷酶在体内担负着重要的生物功能．　糖蛋白、糖脂、蛋白聚糖等糖缀合物的合成和　分解都有糖苷酶的参与。近几年国内外很多　学者，对糖苷酶的研究和应用十分关注。糖苷　酶及其同工酶的测定对一些遗传性糖原沉积　病，肝癌、肝硬化等肝病，肾病，糖尿病早期肾　病、肾移植、甲状隙功能亢进和低下等疾病的　诊断，病情监测有着十分重要的意义。　几种主要糖苷酶的分布殛其同工酶　Ｎ·乙酰一　Ｄ一氨基葡萄糖苷酶（Ｎ—ａｃｅｔｙｌ—　Ｄ·ｇｌｕｃｏｓａｍｉｎｉｄａｓｅ　ＮＡＧ　Ｅｃ３·２·ｌ·３０）　存在于人体肝，脑、肾、肺、胎盘等器官的溶酶　体内。ＮＡＧ有同工酶Ａ、Ｂ、Ｉ［１］。水解ｌ一４糖　苷键　Ｎ一乙酰·氨基己糖苷酶（　Ｎ—ａｃｅｔｙｌ　ｈｅｘｏｓａｍｉｎ·ｉｄａｓｅ，　ＮＡＨ　Ｅｃ·３·２·１·　５２）。广泛存在于人体各组织中，尤以肝、晒、　胎盘最为丰富，是一种溶酶体酸性水解酶。口．　ＮＡＨ有两个主要的同工酶分别为同工酶Ａ　和Ｂ。同工酶Ａ含有ａ和ｐ两个亚基，Ｂ仅含　种ｐ亚基。Ｈｕｈａｂｅｒｇ　Ｂ等报道，　ＮＡＨ至　少存在五种同工酶，按等电点顺序分别为同　工酶Ｂ、Ｔ、Ｐ、Ａ、Ｓｃ　。　ａ—Ｌ一岩藻糖苷酶（ａ．Ｌ．Ｆｕｃｏｓｉｄａｓｅ，ＡＬＦ　＊中原油田职工中心医院进修生　Ｅｃ·３·２·ｌ·５２）水解与半乳糖２位、Ｎ·乙　酰葡萄糖苷３、４、６位连接的岩藻糖残基．　ＡＬＦ是一种溶酶体的酸性水解酶。Ｊｏｈｎｓｏｎ—　ＳＷ等用ＳＤＳ／ＰＡＧＥ和ｗｅｓｔｅｒｎ＿ｂｌｏｔｉｎｇ两　种方法得到ＡＬＦ两条蛋白链。一条为　５ｌｋＤａ｝另一条为５６ｋＤａ，用ＰＡＧ·ＩＥＦ、多克　隆、单克隆抗体，印溃试验测得ＡＬＦ有五个　同工酶，ＰＩ为３．６～６．０口］。　口．Ｄ．半乳糖苷酶（　Ｄ—Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａｓｅ，　ＧＡＬ　Ｅｃ·３·２·ｌ·２５）。分布在肝、肾、骨、　脑、睾丸和胃肠细咆，是一种溶酶体酶，在　ＤＥＡＥ．纤维素柱上，可以分离到四种同工　酶。　Ｄ·葡萄糖醛酸酶（　Ｄ—Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，　Ｇｌ　ｕ　Ｅｃ·３·２·ｌ·３１）。分布在人体内各　组织中，肝畦的活性最高，肾脏组织中也有一　定的酶活力。催化　结构与ｃ。位上连接的葡　萄糖醛酸残基水解。同工酶分三种，最适ｐＨ　为３．８，４．５，５．２，分子量为７６ｋＤａ，６４ｋＤａ，　ｌ８ｋＤａ［　＝、糖苷酶殛其同工酶的检测方法　（一）同位素标记法ｔ　用同位素ＰＨ］、［】‘Ｃ３等标记底物，在糖　苷酶的作用下，根据产物的放射性强度的变　化，来确定糖苷酶的活性。此方法主要用在糖　苷酶和糖蛋白糖链的研究上，常规检测用的　较少。　（二）荧光法：　维普资讯 http://www.cqvip.com

国外医　恒廓皇塑垡兰　量墼堂佥堡　！！　垩塑　堂蔓　塑　４－ＭＵ－４－糖基—　—＋４一ＭＵ＋糖　纤维化星正柏关”　。　不同的糖苷酶要用相应四甲基伞形酮　３．糖尿病早期肾病诊断和糖尿病监测：　４．ＭＵ（４－ＭｅｔｈｙＩｕｍｂｅ１１ｉｆｅｒｏｎｅ）糖苷作为底　胰岛素依赖性糖尿病ＵＤＤＭ）无血管病　物。激发波长３６０ｎｍ，发射渡长４４０ｒｉｍ测　变和有血管病变血清尿中ＮＡＧ均升高．但　定　是后者升高更明显。有血管病变者尿中ＮＡＧ　（三）比色法：　的同工酶ＮＡＧ—Ａ是主要成分，尿中ＮＡＧ　Ｒ一糖基＋Ｈ　ｏ—　：　ＲｏＨ＋塘　升高是反映肾脏受损的一个特别敏感的指　不同的糖苷酶底物糖基不同。Ｒ为发色　标．可用作为糖尿病控制的一个指标　。．　基团　ＮＡＧ的底物发色基团主要有４一硝基　Ｋａｒｅｎ　Ｍ等报道了ＩＤＤＭ无尿蛋白病人尿　苯酚基（ＰＮＰ）ｎ］，２－氯　４一硝基苯酚基　中ＮＡＧ活性升高，但无显著性，作者用酶分　（ＤＮＰ）【　，３．３－二氯苯磺酞基（ＣＰＲ）［　，间甲　泌值（酶量／肌酐）指｝示，发现糖尿病肾病早朝　酚磺酞基（ＭＣＰｆｉ　，其它酶底物的发色基团　患者该值为０．４２４．对照组为０．２４２，两者有　与ＮＡＧ基率一致。ＧＬＵ的底物发色基团除　显著性，提供了一个进行性估价肾脏变性坏　ＰＮＰ外，还有还原酚酞、８一羟基喹啉０　。　死的敏感性指标［　。　ＮＡＨ的底物糖基可以为　Ｎ一乙酰氩基葡萄　４．Ⅱ型牯多糖贮积病的诊断：访病是常　糖基或口一Ｎ一乙酰氩基半乳糖基　染色体隐性遗传病，缺乏ＮＡＧ酶，患者　（四）酶联免疫分析法：　ＮＡＧ降低甚至为零．为诊断此病的重要依　ＧＬＵ检测除前三种方法外，还有报导用　据　酶免疫方法，制备多克隆抗体，测定有活性和　５．孕妇的ＮＡＧ升高：以妊娠开始到３７　无活性的酶蛋白“】。　周进行性增高，３７周为最高，分娩后逐渐下　（五）同工酶检测方法：　降至正常　。　同工酶检测方法有醋酸纤维薄膜电泳、　６．隐性静脉曲张ＮＡＧ的变化：Ｈａｙｅｒ　琼脂糖电泳　等电聚焦电泳、ＤＥＡＥ纤维柱　ＡＭ等在隐性静脉曲张时，测定患者血清和　层析、热处理法和免疫法。　ＮＡＨ同工酶已　静脉切片ＮＡＧ的活性，发现，血清和静脉切　有报道甩热处理法Ｅｌ１］，免疫法有酶免疫分析　片中ＮＡＧ活性均增高，且二者相关．ｒ一　法　］、免疫反应沉淀法　］。ＮＡＧ同工酶已有　０．８２０　Ｐ＜０．００１。增高的原固不明，但可能　报导甩离子交换柱层析法“　。　成为隐性静脉曲张的一种标志“　。　三、临床应用　（二）　ＮＡＨ：测定　ＮＡＨ在ＴＳＤ、　ＳＨＤ、各种肝病、甲状腺聃髓亢进、低下等疾　（－－）ＮＡＧ：各种标本和不同的方法，测　病的活性，对这些疾病诊断可提供一个有益　定酶的活性存在差异。ＮＡＧ及同工酶活性　的指标。　测定用于以下疾病的诊断和鉴别诊断。　１．ＴＳＤ（Ｔａｙ—Ｓａｃｈｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）与ＳＨＤ　ｌ　肾功能损坏的标志：在肾移植病人标　（Ｓａｎｄｈｏｆｆ＇ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ）的诊断和鉴别诊断：　本中，ＮＡＧ活性中度升高，但慢性肾衰时，肌　ＴＳＤ系常染色体隐性遗传病．本病患者缺乏　酐大于２５０＃ｍｏｌ／Ｌ，血清中ＮＡＧ下降．肾移　同工酶Ａ，ＳＨＤ也是常染色体隐性遗传病，　植以ＮＡＧ同工酶Ｉ升高为主，但ＮＡＧ．Ｉ　患者缺乏同工酶Ａ和Ｂ，存在同工酶ｓ　两种　与移植成功与否不相关“　。　疾病　ＮＡＨ及同工酶都比对照组低，Ｐ＜Ｏ．　２．肝纤维化标志：各种肝病ＮＡＧ均升　００１·ＴＳＤ病人同工酶Ａ为零。两种疾病携带　高，以慢性活动性肝炎和肝硬化升高最为显　者，　ＮＡＨ降低．同工酶Ｂ活性升高…］。　著，ＮＡＧ增高反映了肝细咆变性坏死后胶原　２．各种肝病：各种肝病中，该酶活性均增　纤维合成增加，肝硬化ＮＡＧ—Ａ　增高与肝　高。于嘉屏报道原发性肝癌最高为３０．５９士　维普资讯 http://www.cqvip.com

国外医学临床生物化学　蝗堕堂堂塑　！！　生蔓　堂蔓　塑　８１　９．８５Ｕ／Ｌ．其次为肝硬化、慢活肝、急肝、慢迁　肝，Ｐ值均小于０．００１，同工酶Ａ各种肝病均　升高，原发性肝癌为２６．４５士１０．３８ｕ／Ｌ　，　但靳仙宝报道了ｐ—ＮＡＨ以息性肝炎增高最　为明显，为ｔＯｌ？±４６４．６ｎｍＭ·Ｓ～／Ｉ　，阳性　率为９３　．同工酶Ａ在肝癌、肝硬化、慢活肝　显著性增高，Ｐ＜０．００１．阳陛率为ｉ００　。　３．妊娠期　ＮＡＨ的活性：从怀孕到３７　周呈进行性增高．９个月升至为Ｉ　７２２士４３８．８　ｎｍｏｌＳ一　／Ｌ　Ｃ　。　４．Ｏｂｅｒｋｏｔｔｅｒ　Ｉ　Ｖ等报道６例甲低６倒　甲亢，血清中ｐ　ＮＡＨ与甲状腺功能呈正相　关，ｒ＝０．８４，同工酶Ａ升降与甲状腺功能亢　进下降一致。甲亢、甲低经过治疗，病情恢复．　ＮＡＨ也趋向正常。　（三）ＡＩ　Ｆ：　１，岩藻糖苷贮积症的诊断：此病是先天　性ＡＩ　Ｆ缺乏，造成大量的岩藻糖苷贮存在人　体的各种组织中，尿中也有大量排出＿ｌ　。　２．肝癌的诊断：　Ｇｉａｒｄｉｎａ　ＭＧ等报道了２１例肝细咆肝　癌（ＨＣＣ），血清中的ＡＬＦ为５７５．６士２１２．９６　ｎｍｏＬ／ｍｌ／ｈ，以ＡＬＦ＞４４３ｎｍｏｌ／ｍｌ／ｈ为临　界值，ＡＬＦ诊断ＨＣＣ灵敏度为７６　，特异性　为９０．９　，慢肝、其它恶性肿瘤，ＡＬＦ虽然增　高，但都低于４４３ｎｍｏｌ／ｍｌ／ｈ。然而ＡＦＰ当临　界值４００ｎｇ／ｍｌ时，诊断ＨＣＣ的灵敏度　４２．９　，特异性为１００　，ＡＦＰ临界值为　２０ｎｇ／ｍｌ时，灵敏度为５７．１　，特异性为　８３．７　。作者认为ＡＬＦ联合ＡＦＰ、超声波是　诊断ＨＣＣ非常有价值的指标０　。Ｍａｒｏｔｔａ—Ｆ　等报道了４１例肝病病人，评价ＡＬＦ、ＡＦＰ对　原发性肝癌、肝硬化后肝癌的诊断价值，肝癌　组和肝硬化组，ＡＬＦ、ＡＦＰ均增高，ＡＦＰ临　界值为５００ｎｇ／ｍｌ时诊断肝癌的假阳性率为　４３　，ＡＩ　Ｆ＞７４０ｎｍｏｌ／ｍｌ／ｈ为临界值，灵敏　度为８４　，特异性为９４　０　。　Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ　ＷＩ等报道３５例肝细咆癌　（ＨＣＣ）、３５例肝硬化二者ＡＬＦ有重叠，但　ＨＣＣ的ＡＩ　Ｆ增高的幅度更大，Ｐ＿＜Ｐ《　。肝　硬化转变为ＨＣＣ的病例中，６６个月前发现　ＡＬＦ升高，然后呈进行性增高。同时发现癌　组织中ＡＬＦ比肝硬化组织中ＡＬＦ低，这些　结果可能意味着肝癌组织ＡＬＦ向血清中释　放增加，它部份解释了肝癌细咆中减少和血　清中ＡＩ　Ｆ升高的原因　。　张世民等报道血清中四种糖苷酶对原发　性肝癌和转移性肝癌的诊断价值，ＡＬＦ在原　发性肝癌阳性率为６６．８　，其它三种酶都低　于５Ｏ　，作者认为ＡＩ　Ｆ对原发性肝癌的诊　断和鉴别诊断非常有价值，尤其是ＡＦＰ阳性　的原发性肝癌０　。　（四）ＧＡＬ：　尿中ＧＡＬ与ＮＡＧ分析，有利于糖尿病　肾病、其它肾病的诊断和预后判断０　。检测　ＧＬＡ可以确诊ＧＭ、神经节苷酯贮积症、　Ｋｒａｂｂｌｅ病。ＧＭ病是常染色体隐性遗传病，　本病缺乏ＧＡＬ　Ｋｒａｂｂｌｅ病是一种家族性白　质病，又称家族性婴儿脑硬化病，本病缺乏半　乳糖脑苷酶，半乳糖苷酶可以参与脑苷酯的　降解　（五）ＧＬＵ：　ＧＬＵ在肝硬化、糖尿病均可以升高，肝　癌、孕妇也可以升高，但最有意义的是急性肝　炎　。在急性肝炎时．临床上恒量肝细咆变　性、坏死最有价值的是ｍＧＯＰ，但ｍＧＯＰ半　衰期短，而且测定繁锁。ＧＬＵ的酶蛋白　Ｅｌ　ＩＳＡ测定，更能衡量肝细咆的变性坏　死“　。多粘寡糖沉积症Ⅶ型缺乏此酶，测定此　酶可以确诊该病。　结语　与临床密切相关的糖苷酶主要为上述的　五种，其它糖苷酶如Ｐ—Ｄ一葡萄糖苷酶、口一Ｄ一甘　露糖苷酶等应用较少，目前只限于一些粘多　糖沉积症的诊断。随着上述五种糖苷酶的广　泛应用．预计对一些相关性疾病的诊断、监测　有所帮助。　参考文献　１　Ｆｒ６ｄｅｒｌｃ　Ｌｏ　Ｋｏ　ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ．１９９１；４｝５８３　２　Ｈｕｈａｂｅｒｇ　Ｂ　ｅｔ　ａ１．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｌｍ　Ａｃｔａ，１　９９３　Ｆ　２１５　７３—７９　维普资讯 http://www.cqvip.com

国外医学临床生物化学　墼堕生　堑　生整　堂整　３　Ｊｏｈｎｓｏｎ　ＳＷ　ｌ￣ｉｏｃｈｅｍ　Ｊｔｌ９９２；２８２，８２９－－８３４　１３于嘉屏等．中华医学消化杂志，１９９１；Ｉ：１９—２ｌ　４　Ｗｉｎｔｅｒ　ＪＭ　ｅｔ　ａ【　ｃｌ　ｎ　ｃｂ　ｍ　Ａｃｔａ，１９９２；２０８；　１４　Ｇｉａｖａｒｌｏ　ｅｔ　ａＩ．Ｃｌｌｎ　Ｃｈｕｍ，１９８８；３４：２４３０－－２４３４　ｌ７３一ｌ８１　１５陈道宏等．国外医学．临床生化与检验学分册·　５　Ｏｂｅｒｋｏｔｔｅｌ＂ＬＶ　ｅｔ　ａＩ．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａｔ１９８０；１０８：　１９８９；Ｉ：驺　６ｌ一６３　１　６王诗瑾等　中华医学检验杂志，１９８９；５：２６７—　６　Ｋａｒｅｎ　Ｍ　ｅｔ　ａ】．Ｃ】ｉｎ　Ｃｈｌｍ　ＡＣｔａ，１９９３；２１６；１２５—　８７ｌ　１３３　Ｉ　Ｈｚｇｅｒ　ＡＭ　ｅｔ　３ｆ．ｄｆ　Ｃｈｉｍ　Ａｃｔａ，１９９１．；２０８：　７　Ｍａｋｉｓｅ　Ｊ　ｆｉｔ　ａＩ．Ｃｌｉ　Ｃｈｅｍ．１９９０；３６　ｆ８ｌ９—３２２　２４３－－３４８　８　Ｋｌａｕｌ　Ｊｕｎｇ　ｅｔ　ａＩ．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｌｍ　Ａｃｔａ，１９９１：２０８：　１８靳『山宝等．中华医学检验杂志，１９９３；３：Ｉ５７　４Ｏ５—４Ｏ６　Ｉ　９　Ｇ　ｄｒｄｉｎａ　ＭＧ　ｅｔ　ａＩ．Ｃａｎｃｅｒ，Ｉ　９９２；７０：１０４４——　９　Ｋｏａｉｎｇｓ　ＣＨ　ｅｔ日ｌ　Ｃ｜ｉｎ　Ｃｈｅｍ－１９９０￣３６￣４０２－－４０３　１０４８　１０　Ｕｌｒｉｃｈ　Ｂｅｒｇｍｙｅｒ（ｅｄｓ）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　ＺＯ　Ｍａｒｏｔｔａ　Ｆ　ｅｔ　ａ【－Ｄｉｇ　Ｄｉｓ　ｓｃ【·１９９１’３ｂ：９９３—９９７　Ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｖｏ［ＩＶ，Ｖｅｒｌａｇ　Ｇｅｒｍｓｎｙ　１９８４；２６３一　２Ｉ　Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎ　ＷＬ　ｅｔ　ａＩ．Ｃｌｉｎ　Ｓｃ；Ｃｏｌｔｈ，１９９Ｉ；８１；　Ｚ８８　１７７一ｌ８２　１１　Ｅ］ｉｚａｂｅｔｈ　ｅｔ　ａＩ．Ｃｌｉｎ　Ｃｈｅｍ　ｌ９９３ｆ　９：１８Ｉｌ一１８１４　２２张世民等．中华肿窟杂志，１９９２，Ｉ４：１４３－－１４８　１２　Ａｎｄｅｒｓ　ｅｔ　ａ１．Ｃｌｋｎ　Ｃｈｅｍ，１９９３；７｛１ｎ２—１４１Ｓ　２３　Ｍａｋ　】Ｋ．ｎｉｎ　Ｃｈｅｍ，１９８８；３４：２１４０－－２１４３　全国“临床检验与实验诊断”学术征文通知　为推动临床检验与实验室诊断技术水平的提高，使广大专业人员的工作经验、科研成果能以学术论文的　形式及时地在专业杂志上公开发表，本编辑部越举办全国　临床检验与实验诊断　学术征文活动，现将有关事　宜通知如下；　征文内窖：　１．有关医学检验的文章包括临床检验、临床生也、临床徽生物、免疫学进展、临床血液学、录血与辘血、血　｛疰流变学ｆ各种体｛疰检验；散量医学检验，病理学检验，分子生物学检验，遗传学检验等．２．临床各科实验室检　查及检；冀ｆ新方法，新技术的应用与研究。３医学检验及实验室室内质控，室同质评，质控品及试剂的研割与应　用．４．各地临检中心，检验科及实验室的管理经验和科掌管理方法．５．各种检验试剂，仪器的临床应用，评价与　昔理。８．医院内感染的病原学、捐因学分析及蕊防监测发展趋势。７．医学检验教育．８．实验诊断手段和方法在　临床医疗工作中的应用。９．计算机在实验室的应用与开发。　＝，征文要求：　①以论著　综述、译文、编译、文摘或工作报告，经验空漉，笔谈等形式投稿．请在来稿文题下注明作者单　位、邮编造Ｅ名　并附第一作者单位升绍信或加盖公章。②每篇文稿碾２０００字以内．尽量勿用田表。所有计量单　位均采用国际统一标准，＠论著和综述须附１Ｏ０字左吉摘要。３十关德词和５条以内的参考文献　三，征文处理：　编辑部收到征文来稿后，将及时给作者寄文录用通知．论文按学科审定台格后编凡由国家辞委批准　的本刊１９９５年增刊中·增于ｕ诎于今年第三季度（九月左右）正式出刊。今年ｌＯ月与山东省临检中心在山东泰　安联台举办全国“临床检验与头渔谚断学术交流会　。届时向论文怍者奇投开会通知。邀请第一、二作者出席大　会斗作交流发言．会上向作者赠选增刊并颁文证书。因竹不能捌曹的作者。会后编辑部负责将书和　等挂号邮寄给作者。　征文截搞时间：１９９５年６月１２日，请论文作者在征文信封上注明　临检征文　字样。邮寄至重庆市青年路　４４号（邮编６３００１０）《国外医学埔　辑帮陈新黔收．论文录用通知和正式开会通知另拉　欢迎投禳，政迎垂询联系电话：０８Ｉ１－－３８４Ｉ９７８（白天）；０８１１－－３８５３９１３（夜）　ｔ国外医学临床生物化学与拴驻学分册》蕾辑部